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| 品牌 | NobleRyder/诺博莱德 | 货号 | BR6028 |
|---|---|---|---|
| 规格 | 100T/96S | 供货周期 | 现货 |
| 主要用途 | 在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药 |
磷脂酶 C（ Phospholipases C，PLC ）试剂盒说明书
微量法 100T/96S
磷脂酶 C试剂盒 脂肪酸系列
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
磷脂酶C（EC3.1.4.3）是一种水解甘油磷酸酯C3 位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶，广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中，在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。
测定原理：
磷脂酶C 催化水解NPPC 产生对硝基苯fen，在 410nm 处有特征吸收峰。
组成：
产品名称 | BR6028-100T/96S | Storage |
提取液：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 102ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 10ml | 4℃避光 |
试剂三：液体 | 8ml | 4℃ |
说明书 | 一份 | |
自备仪器和用品：
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
酶液提取:
组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1ml 试剂一。
细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于 4℃，10000g离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1ml 试剂一。
血清：直接测定。
测定操作:
空白管 | 测定管 | |
样品（μl） | 20 | |
试剂一（μl） | 20 | |
试剂二（μl） | 100 | 100 |
充分混匀，37℃反应 30min | ||
试剂三（μl） | 80 | 80 |
充分混匀，于微量石英比色皿/96 孔板，蒸馏水调零，测定 410nm 处吸光值，分别记为 A 空白管和A 测定管，△A=A 测定管-A 空白管。 | ||
酶活计算公式:
用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991
按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基苯fen所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr
按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基苯fen所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/g 鲜重）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ W
按照细胞数量计算
酶活性定义：每 104 个细胞每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基苯fen所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ 细胞数量
按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基苯fen所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/ml）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷V 样÷T
= 17.45×（△A+0.0103）
V 反总：反应总体积，0.2ml；V 样：加入样本体积，0.02ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0095x - 0.0103，R2 = 0.9991
按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基苯fen所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T
= 35.09×（△A+0.0103）÷ Cpr
按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基苯fen所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/g 鲜重）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) ÷T
= 35.09×（△A+0.0103）÷ W
按照细胞数量计算
酶活性定义：每 104 个细胞每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基苯fen所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量) ÷T
=35.09×（△A+0.0103）÷ 细胞数量
按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基苯fen所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/ml）= （△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反总÷V 样÷T
= 35.09×（△A+0.0103）
V 反总：反应总体积，0.2ml；V 样：加入样本体积，0.02ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
磷脂酶 C试剂盒 脂肪酸系列
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