ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶，催化乙醇与乙醛可逆转换，在很多生理过程中起着重要作用。
乙醇脱氢酶活性测定试剂盒 辅酶Ⅰ

乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase，ADH）活性测定试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

乙醇脱氢酶活性测定试剂盒 辅酶Ⅰ

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做定。测定意义：

ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶，催化乙醇与乙醛可逆转换，在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH 主要在肝脏生成，肝脏损伤导致ADH 释放到血清中。血清ADH 活性高低反映了肝功能是否异常。

测定原理：

ADH 催化NADH 还原乙醛生成乙醇和NAD⁺，NADH 在 340nm 处有吸收峰，而 NAD⁺没有；测定 340nm吸光度下降速率，来计算ADH 活性。

组成：

试剂三：粉剂×2 瓶，－20℃保存。临用前加入 22ml 试剂二，现配现用。

自备仪器和用品：

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1ml 石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。

粗酶液提取：

1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；16000g， 4℃离心 20min，取上清液置冰上待测。

3、血清等液体：直接测定。

ADH 测定操作：

分光光度计预热 30 min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。

试剂三在 25℃水浴中保温 30 min。

在 1ml 石英比色皿中依次加入 100μl 样本上清液、800μl 试剂三和 100μl 试剂四，迅速混匀后于 340nm

测定吸光值变化，分别记录 15s 和 75s 时吸光值，分别记为A1 和A2。△A 测定管=A1-A2。

计算公式：

按照蛋白浓度计算

活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(Cpr×V 样)÷T

=1608×△÷Cpr

按照样本质量计算

活性单位定义：25℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/g 鲜重) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=1608×△A÷W

按细胞数量计算

活性单位定义：25℃中每 104 个细胞每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

=1608×△A ÷细胞数量

按液体体积计算

活性单位定义：25℃中每毫升血清每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷V 样÷T

=1608×△A

ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V 反总：反应体系总体积，1000μl=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；V 样：加入反应体系中上清液体积，100μl=0.1 ml； T：反应时间，1min。

乙醇脱氢酶活性测定试剂盒 辅酶Ⅰ