甲醛是一种能与蛋白质、核酸和脂类产生非特异性反应的活泼化合物，对所有生物都具有很高毒性。甲醛脱氢酶作为含锌中等链醇脱氢酶（ADH）的家庭成员之一，广泛存在于原核和真核生物中，该酶能利用NAD+作为辅酶，将有毒的甲醛氧化，是甲醛氧化途径中的关键酶。
甲醛脱氢酶试剂盒 辅酶Ⅰ

甲醛脱氢酶（Formaldehyde Dehydrogenase，FDH）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

甲醛脱氢酶试剂盒 辅酶Ⅰ

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

甲醛是一种能与蛋白质、核酸和脂类产生非特异性反应的活泼化合物，对所有生物都具有很高毒性。甲醛脱氢酶作为含锌中等链醇脱氢酶（ADH）的家庭成员之一，广泛存在于原核和真核生物中，该酶能利用NAD⁺作为辅酶，将有毒的甲醛氧化，是甲醛氧化途径中的关键酶。

测定原理：

甲醛脱氢酶催化甲醛和 NAD⁺产生NADH，在 340nm 处的吸光值会增加，测定 340nm 处的吸光值变化，可计算得到甲醛脱氢酶的活性。

组成：

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 15ml 水溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 3ml 水溶解待用。

自备仪器和用品：

天平、离心机、分光光度计、1ml 玻璃比色皿、蒸馏水。

FDH 提取:

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 20min。

细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

液体：直接检测。

测定操作表:

1、分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、操作表

在比色皿中加入如下试剂

混匀，于 340nm 下测定初始吸光值A1 与 5min 后的吸光值A2，△A=A2-A1。若样本数量较多，可将试剂按比例配成工作液使用。

FDH 酶活计算:

按蛋白浓度计算

酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化还原 1nmol NAD+的酶量为 1 个酶活单位。

FDH 酶活（nmol/min/mg prot）=

按样本质量计算

A ×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T = 322×△A÷Cpr

 d 

酶活定义：每克样品每分钟催化还原 1nmol NAD+的酶量为 1 个酶活单位。 

FDH 酶活（nmol/min/g 鲜重）=

按照细胞数量计算

A ×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T =322×△A÷W

 d

酶活定义：每 104 个细胞每分钟催化还原 1nmol NAD+的酶量为 1 个酶活单位。

FDH 酶活（nmol/min/104cell）=数量

按液体体积计算

A ×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量（万个））÷T= 322×△A÷细胞

 d

酶活定义：每ml 样本每分钟催化还原 1nmol NAD+的酶量为 1 个酶活单位。

FDH 酶活（nmol/min/ml）=

A ×V 反总÷V 样÷T=322×△A

 d

：NADH 微摩尔消光系数，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应体系总体积，1ml； V 样：反应体系中样本体积，0.1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；T，反应时间，5min；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g

甲醛脱氢酶试剂盒 辅酶Ⅰ