PDC 催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH 在 340 nm 有吸收峰，而 NAD+没有；通过测定 340 nm 光吸收下降速率，来计算 PDC 活性。
丙酮酸脱羧酶PDC活性测定试剂盒 脂肪酸系列

丙酮酸脱羧酶（PDC）活性测定试剂盒说明书

微量法 100T/96S

丙酮酸脱羧酶PDC活性测定试剂盒 脂肪酸系列

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

PDC 主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

测定原理：

PDC 催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和NAD⁺；NADH 在 340 nm 有吸收峰，而 NAD⁺没有；通过测定 340 nm 光吸收下降速率，来计算 PDC 活性。

组成：

混合试剂：临用前配制，将试剂四和试剂五转移至试剂三中充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪

粗酶液提取：

1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 200 万细菌或细胞加入 400μl提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 200W，工作 3s，间歇 10s，工作 35 次），16000g 4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。

2、组织处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml试剂一）进行冰浴匀浆，16000g 4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。

PDC 测定操作：

分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。

试剂二置于 25℃水浴中预热 30min。

空白管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μl 蒸馏水、20μl 混合试剂、140μl 试剂二和 20μl 试剂六，迅速混匀后于 340nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为A1 和A2。

测定管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μl 上清液、20μl 混合试剂、140μl 试剂二和 20μl 试剂

六，迅速混匀后于 340nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为A3 和A4。

注意：空白管只需测定一次。

PDC 活性计算：

使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

按照蛋白浓度计算

活性单位定义：25℃中，每毫克蛋白每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。

PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109}÷(Cpr×V 样) ÷T

=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr

按照样本质量计算

活性单位定义：25℃中，每克组织每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。

PDC (nmol/min /g 鲜重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109}÷(W×V 样÷V 样总) ÷T

=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W

按细胞数量计算

活性单位定义：25℃中，每 104 个细胞每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。

PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109}÷(细胞数量×V 样÷V 样总) ÷T

=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷细胞数量

按血清（浆）体积计算

活性单位定义：25℃中，每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。PDC (nmol/min

/ml) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109}÷V 样÷T

=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]

ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 总：反应体系总体积，0.2ml=2×10-4 L，V 样：加入反应体系中上清液体积，0.02ml；V 样总：提取液体积，1 ml；Cpr：蛋白浓度（mg/ml），需要另外测定，建议使用本公司BCA 蛋白质含量试剂盒；W ：样品质量； T：反应时间，1 min。

使用 96 孔板测定的计算公式如下

按照蛋白浓度计算

活性单位定义：25℃中，每毫克蛋白每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。

PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109}÷(Cpr×V 样) ÷T

=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr

按照样本质量计算

活性单位定义：25℃中，每克组织每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。

PDC (nmol/min /g 鲜重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109}÷(W×V 样÷V 样总) ÷T

=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W

按细胞数量计算

活性单位定义：25℃中，每 104 个细胞每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。

PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109}÷(细胞数量×V 样÷V 样总) ÷T

=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷细胞数量

按血清（浆）体积计算

活性单位定义：25℃中，每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。PDC (nmol/min

/ml) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109}÷V 样÷T

=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]

ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V 总：反应体系总体积，0.2ml=2×10-4 L，V 样：加入反应体系中上清液体积，0.02ml；V 样总：提取液体积，1 ml；Cpr：蛋白浓度（mg/ml），需要另外测定，建议使用本公司BCA 蛋白质含量试剂盒；W ：样品质量； T：反应时间，1 min。

丙酮酸脱羧酶PDC活性测定试剂盒 脂肪酸系列