LOX 催化亚you酸氧化，氧化产物在 280nm 处有特征吸收峰；测定 280nm 吸光度增加速率，来计算 LOX活性。
脂氧合酶LOX活性测定试剂盒 脂肪酸系列

脂氧合酶（LOX）活性测定试剂盒说明书

微量法 100T/48S

脂氧合酶LOX活性测定试剂盒 脂肪酸系列

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

LOX 广泛存在于动植物组织中，催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在生物体的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。

测定原理：

LOX 催化亚you酸氧化，氧化产物在 280nm 处有特征吸收峰；测定 280nm 吸光度增加速率，来计算 LOX活性。

组成：

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、可调式移液枪和蒸馏水。

粗酶液提取：

按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

测定：

分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 280 nm，蒸馏水调零。

在试剂三中加入 10ml 试剂二（振荡混匀 1min），在 30℃水浴中预热 10 min 以上。用不完的试剂 4℃

保存。

对照管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μl 样本和 180μl 试剂二，30℃反应 30min 后，记录A对照。

测定管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μl 样本和 180μl 试剂三，30℃反应 30min 后，记录A测定。

ΔA=A 测定-A 对照

LOX 活性计算：

按照蛋白浓度计算

活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1 个酶活单位。

LOX (U/mg prot) =ΔA×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×100

= 33.33×ΔA÷Cpr

按照样本质量计算

活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1 个酶活单位。

LOX (U/g 鲜重) =ΔA×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×100

= 33.33×ΔA÷W

Cpr：上清液蛋白浓度，mg/ml，需另外测定；V 反总：反应体系总体积，200μl=0.2ml；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μl=0.02ml；W ：样品质量，g；V 样总：上清液总体积，1ml；T：反应时间，30min。

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