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| 品牌 | NobleRyder/诺博莱德 | 货号 | BO6035 |
|---|---|---|---|
| 规格 | 100T/96S | 供货周期 | 现货 |
| 主要用途 | LPS 催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药 |
土壤脂肪酶（Solid-Lipase，S-LPS）活性试剂盒说明书
微量法 100T/96S
土壤脂肪酶活性试剂盒
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS 广泛的存在于各种生物中。
测定原理：
LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活性。
试剂组成和配制：
产品名称 | BO6035-100T/96S | Storage |
试剂一：液体 | 65ml×2 | 4℃ |
试剂二：液体 | 10ml | 4℃ |
试剂三：甲苯 | 80ml（自备） | 4℃ |
试剂四：液体 | 10ml | 4℃ |
标准品：液体 | 10 μl | 4℃ |
说明书 | 一份 | |
试剂二：液体 10ml×1 瓶，4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡 20min。
标准品：液体 10 μl×1 瓶，10 µmol/ml 的标准溶液，4℃保存。临用前加入 3.168 ml 甲苯，充分溶解。
自备仪器和用品：
研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、甲苯 80ml、冰和蒸馏水。
样本处理：
建议称取约 0.1g 土样，加入 1ml 试剂一进行冰浴匀浆，再用回旋式振荡器振荡提取 15min，4℃，4000g离心 10min，取上清待测。
S-LPS 测定操作：
1、分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 710 nm，蒸馏水调零。
2、试剂一和试剂二置于 37℃水浴预热 30min。
3、在 1.5ml EP 管中依次加入下列试剂；
试剂名称（μl） | 空白管 | 测定管 | ||
蒸馏水 | 150 | |||
样本 | 50 | |||
试剂一 | 300 | 300 | ||
试剂二 | 100 |
37℃振荡反应 10 min。
试剂三 | 800 | 800 |
37℃振荡反应 10 min 后，8000g，25℃，离心 10min，取上清液
试剂名称（μl） | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
上清液 | 400 | 400 | |
标准品 | 400 | ||
试剂四 | 100 | 100 | 100 |
37℃振荡反应 5 min 后，静置 5min，取 200μl 上层液加入微量石英比色皿/96 孔板，于 710nm 处测定吸光值。
注意事项:
空白管和标准管只需测定一次。
S-LPS 活性计算公式：
活性单位定义：37℃中每克土样每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
S-LPS (μmol/min/g 土样) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]×V 反总÷（W×V样÷V 样总）÷T=16×[(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]÷W
C 标准品：10 µmol/ml；V 反总：反应总体积，0.8ml；V 样：反应中加入样本体积，0.05ml；V 样总：加入提取液体积，1ml； W：样本质量，g；T：催化反应时间，10 min。
土壤脂肪酶活性试剂盒
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