C1（EC3.2.1.91）存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，C1 催化多聚糖链的末端非还原端释放出纤维二糖和葡萄糖。
土壤外切葡聚糖酶/纤维二糖苷酶活性试剂盒

土壤外切-β-1，4-葡聚糖酶/纤维二糖苷酶（S-C1）活性测定试剂盒说明书

微量法 100 管/48 样

土壤外切葡聚糖酶/纤维二糖苷酶活性试剂盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

C1（EC3.2.1.91）存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，C1 催化多聚糖链的末端非还原端释放出纤维二糖和葡萄糖。

测定原理：

采用 3,5－二硝基水杨酸法测定S-C1 催化微晶纤维素降解产生的还原糖的含量。

试剂的组成和配制：

自备仪器和用品：

酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样品测定的准备：

称取约 0.1g 新鲜土样或风干土样，加入 1ml 提取液，进行冰浴匀浆，室温振荡提取 30min，然后 10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、加样表（在EP 管中依次加入下列试剂）

混匀，37℃准确水浴 2h

混匀， 90℃水浴 10min（盖紧，防止水分散失），冷却后，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，测 540nm 下吸光值A，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。

S-C1 活性计算：

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为 y = 6.4078x - 0.0673；x 为标准品浓度（mg/ml），y 为吸光值。单位的定义：每g 土样每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-C1 活力(μg /min /g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反总：反应体系总体积，0.11ml； V 样：加入样本体积，0.01 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，120 min； W：样本质量，g；

用 96 孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为 y = 3.2039x - 0.0673；x 为标准品浓度（mg/ml），y 为吸光值。单位的定义：每g 组织每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-C1 活力(μg /min /g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反总：反应体系总体积，0.11ml； V 样：加入样本体积，0.01 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，120 min； W：样本质量，g。

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