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品牌 | NobleRyder/诺博莱德 | 货号 | BN6003 |
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规格 | 50T/24S | 供货周期 | 现货 |
应用领域 | 环保,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药 |
蔗糖合成酶(分解方向;SS-Ⅰ)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
蔗糖合成酶 分解方向SS-Ⅰ试剂盒
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库"器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是双向反应酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意义。
测定原理:
SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP 生成游离果糖和 UDPG,采用 3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的含量来反映酶活性的高低。
组成:
产品名称 | BN6003-50T/24S | Storage |
提取液:液体 | 60ml | 4℃ |
试剂一:液体 | 10ml | 4℃ |
试剂二:液体 | 5ml | 4℃ |
试剂三:粉剂 | 2 支 | -20℃ |
试剂四:液体 | 6ml | 4℃ |
说明书 | 一份 |
试剂三:粉剂×2 支,-20℃保存;临用前每支加入 1.2ml 试剂二充分溶解待用,现配现用;
自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、离心机、移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰
样品测定的准备:
按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在EP 管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μl) | 测定管 | 对照管 | ||
样本 | 20 | 20 | ||
试剂三 | 80 | |||
试剂一 | 80 | |||
试剂四 | 100 | 100 |
混匀,30℃准确水浴 30min 后,95℃水浴 10min,冷却至室温 95℃水浴 5min 左右,冷却至室温
蒸馏水 | 800 | 800 |
混匀,540nm 下测定各管吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需要设一个对照管。
SS-Ⅰ活性计算:
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0012x - 0.0492;x 为标准品浓度(μg/ml),y 为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义:每mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)=[ (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V 反总]÷(V 样×Cpr) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位定义:每g 组织每分钟催化产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g 鲜重) =[(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W
V 反总:反应体系总体积,0.1ml; V 样:加入样本体积,0.02 ml;V 样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g。
蔗糖合成酶 分解方向SS-Ⅰ试剂盒