CL（EC 3.2.1.4）存在于细菌、真菌和动物体内，能够催化羧甲基纤维素降解，是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。
纤维素酶/羧甲基活性测定试剂盒 糖代谢

纤维素酶（cellulase，CL）/羧甲基纤维素酶活性测定试剂盒说明书

微量法 100 管/48 样

纤维素酶/羧甲基活性测定试剂盒 糖代谢

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

CL（EC 3.2.1.4）存在于细菌、真菌和动物体内，能够催化羧甲基纤维素降解，是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。

测定原理：

采用蒽酮比色法测定CL催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。

组成：

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存； 临用前加入 5ml 蒸馏水和 45ml 浓硫酸充分溶解待用。

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、浓硫酸和蒸馏水。

样品测定的准备：

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

加样表和测定步骤：

37℃振荡反应 1h 后，90℃水浴 15min（盖紧，防止水分散失），冷却后

8000g 25℃离心 10min，取上清，得糖化液

混匀， 90℃水浴 10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，测 620nm 下吸光值A，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

CL 活力计算：

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归方程为 y = 5.018x - 0.0462；x 为标准品浓度（mg/ml），y 为吸光值。

2、血清（浆）CL 活力的计算

单位的定义：每ml 血清（浆）每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反总]÷V 样÷T =39.8×(ΔA+0.0462)

3、细胞、细菌和组织中 CL 活力的计算

按照蛋白浓度计算

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力(μg /min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反总]÷(V 样×Cpr) ÷T

=39.8×(ΔA+0.0462) ÷Cpr

按样本鲜重计算

单位的定义：每g 组织每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力(μg /min /g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T

=39.8×(ΔA+0.0462) ÷W

按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T

=0.0796×(ΔA+0.0462)

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反总：反应体系总体积，0.6ml； V 样：加入样本体积，0.05 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，60 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

用 96 孔板测定的计算公式如下

1、标准条件测定回归方程为 y = 2.5090x - 0.0462；x 为标准品浓度（mg/ml），y 为吸光值。

2、血清（浆）CL 活力的计算

单位的定义：每ml 血清（浆）每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷2.509×V 反总]÷V 样÷T =79.6×(ΔA+0.0462)

3、细胞、细菌和组织中 CL 活力的计算

按照蛋白浓度计算

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力(μg /min /mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T

=79.6×(ΔA+0.0462) ÷Cpr

按样本鲜重计算

单位的定义：每g 组织每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力(μg /min /g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总)÷T

=79.6×(ΔA+0.0462)÷W

按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力(μg /min /104cell)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T

=0.1592×(ΔA+0.0462)

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反总：反应体系总体积，0.6ml； V 样：加入样本体积，0.05 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，60 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

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