TAL 广泛存在于植物和微生物中，是苯丙an酸代谢途径的关键酶之一。TAL 能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶（C4H）直接将酪an酸转化为香dou酸，香dou酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯bing素类天然产物。
酪an酸解氨酶试剂盒 抗氧

酪an酸解氨酶（Tyrosine ammonilyase，TAL）试剂盒说明书

微量法 100T/48S

酪an酸解氨酶试剂盒 抗氧

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义

TAL 广泛存在于植物和微生物中，是苯丙an酸代谢途径的关键酶之一。TAL 能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶（C4H）直接将酪an酸转化为香dou酸，香dou酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯bing素类天然产物。

测定原理：

TAL 能够分解酪an酸产生香豆酸，使反应溶液 333nm 下的吸光度随反应时间而上升，根据吸光度的变化率可计算出 TAL 活性。

组成：

自备仪器和用品：

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板（UV 板）、研钵、冰和蒸馏水

粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）果汁等液体样品：直接检测。

测定操作表：

1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 333nm。

2、准备 96 孔 UV 板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于 340nm 务必使用 UV 板）。

3、试剂二的配置：临用前在试剂二瓶中加入 10ml 试剂一充分溶解待用（用不完的试剂 4℃保存一周，注意现配现用），在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。

4、在 EP 管中依次加入如下试剂

混匀，10000g 4℃离心 5min，取 200μl 上清至 96 孔 UV 板，333nm 下测定吸光值 A 测定与 A 对照，

ΔA=A 测定-A 对照

TAL 活性计算：

1、血清（浆）或果汁 TAL 活性

单位的定义：每分钟每 ml 血清（浆）或果汁在每 ml 反应体系中使 333nm 处吸光值变化

0.005 为一个酶活力单位。

TAL（U/ml）=ΔA×V 反总÷( V 样÷V 样总)÷0.005÷T =35×ΔA

2、组织、细菌或细胞 TAL 活性

按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每分钟每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.005 为一个酶活力单位。

TAL（U/mg prot）=ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.005÷T =35×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

按样本鲜重计算：

单位定义：每分钟每 g 组织在每 ml 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.005 为一个酶活力单位。

TAL（U/g 鲜重）=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.005÷T =35×ΔA÷W

按细菌或细胞密度计算：

单位定义：每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.005 为一个酶活力单位。

TAL（U/104 cell）=ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.005÷T =0.07×ΔA

V 反总：反应体系总体积，0.42ml；V 样：加入样本体积，0.04ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml； T：反应时间，60 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。

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