在碱性环境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与 4-氨基安ti比林和铁qing化钾反应红色ya醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510 nm 吸光度增加速率，来计算AKP 活性。
碱性磷酸酶活性测定试剂盒 酯酶系列

碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP/ALP）活性测定试剂盒

分光光度法 50 管/24 样

碱性磷酸酶活性测定试剂盒 酯酶系列

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。

AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。

测定原理：

在碱性环境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与 4-氨基安ti比林和铁qing化钾反应红色ya醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510 nm 吸光度增加速率，来计算AKP 活性。

组成：

试剂四：液体×1 瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。标准品：液体×1 支（EP 管中），2 μ mol/ml 酚标准液，4℃保存。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿和蒸馏水。

粗酶液提取：

组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g 离心 10min，取上清液待测。

细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

血液可直接测定，或者适当稀释后测定。

测定步骤：

分光光度计预热 30min，调节波长到 510 nm，蒸馏水调零。

试剂三置于 37℃水浴中预热 30 min。

空白管：取 EP 管，加入 20μl 蒸馏水，200μl 试剂二，200μl 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温 15min；加入试剂四 600μl，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为A 空白管。

标准管：取 EP 管，加入 20μl 标准品，200μl 试剂二，200μl 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温 15min；

加入试剂四 600μl，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为A 标准管。

对照管：取 EP 管，加入 20μl 上清液，200μl 蒸馏水，200μl 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温 15min；加入试剂四 600μl，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为A 测定管。

测定管：取 EP 管，加入 20μl 上清液，200μl 试剂二，200μl 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温 15min；

加入试剂四 600μl，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为A 测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。每个测定管设一个对照管。

AKP/ALP 活性计算：

血液中AKP/ALP 活力计算

活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚定义为 1 个酶活单位。

AKP/ALP 活力(μmol/min /ml)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总] ÷V 样

÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

组织、细菌或细胞中AKP/ALP 活性计算

按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。 AKP/ALP(μmol/min/mg prot)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(Cpr×V样)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr

按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。

AKP/ALP(μmol/min/g 鲜重)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(W×V 样÷V样总)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W

按照细菌或细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每 104 个细菌或细胞每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。AKP/ALP (μmol/min/104 cell)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T= 6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷细胞数量

C 标准品：2μmol/ml；V 反总：反应体系总体积（ml），1020μl=1.02 ml； V 样：加入反应体系中上清液体积（ml），0.020ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间（min），15 min。

注意事项：

试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。

试剂四变蓝绿色后不能再使用。

加入试剂四后必须立即混匀，否则显色不wan全。

碱性磷酸酶活性测定试剂盒 酯酶系列