AchE 属于丝an酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE 催化乙酰dan碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。
乙酰dan碱酯酶活性测定试剂盒

乙酰dan碱酯酶（acetylcholinesterase，AchE）活性测定试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

乙酰dan碱酯酶活性测定试剂盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

AchE 属于丝an酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE 催化乙酰dan碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。

测定原理：

AchE 催化Ach 水解生成dan碱，dan碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成 5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）； TNB 在 412nm 处有吸收峰，通过测定 412 nm 吸光度增加速率，计算 AchE 活性。

组成：

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 2.6ml 试剂一，充分震荡溶解。试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 2.6ml 试剂一，充分震荡溶解。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清液待测。

细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g， 4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

血清等液体：直接测定。

测定操作：

分光光度计预热 30 min，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。

试剂二置于 37℃水浴中预热 30min。

取 1ml 玻璃比色皿，依次加入 100μl 上清液、800 μl 试剂一、50μl 试剂二和 50 μl 试剂三，迅速混匀，于 412nm 处测定 3min 内吸光值变化，第 10s 吸光值记为A1，第 190s 吸光值记为A2。△A 测定管=A2-A1。

AchE 活性计算公式：

组织AchE 活性

按照蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷（Cpr ×V 样）÷T

= 245×△A÷Cpr

按照样本质量计算

活性单位定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/g 鲜重)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷（W ×V 样÷V 样总）÷T

= 245×△A÷W

细菌、细胞AchE 活性

活性单位定义：每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷（细胞数量×V 样÷V 样总）÷T

= 245×△A÷细胞数量

血清AchE 活性

活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(nmol/min /ml)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷V 样÷T

=245×△A

ε：TNB 摩尔消光系数，13.6×103 L/mol/cm；V 反总：反应体系总体积（L），1 ml=0.001 L；106：1mol=1×106μmol； V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：蛋白浓度（mg/ml）；W：样本质量，g；V 样：加入上清液体积（ml），

0.1 ml；T：反应时间（min），3 min。

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