L-半乳糖途径是合成AsA 的主要途径。Gal LDH 位于线粒体内膜，负责催化植物体内 AsA 生物合成的最后一步，也是该途径的关键酶之一，对植物体内AsA 含量的积累起着至关重要的用。
L-半乳糖酸1,4-内酯脱氢酶活性试剂盒抗坏

L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶（L-galactono-1,4-lactone dehydrogenase，Gal LDH）活性测定试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

L-半乳糖酸1,4-内酯脱氢酶活性试剂盒抗坏

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

L-半乳糖途径是合成AsA 的主要途径。Gal LDH 位于线粒体内膜，负责催化植物体内 AsA 生物合成的最后一步，也是该途径的关键酶之一，对植物体内AsA 含量的积累起着至关重要的用。

测定原理：

Gal LDH 催化L-半乳糖内还原细胞se素c（Cyt c），还原型Cyt c 在 550nm 有吸收峰；测定还原型Cyt c 增加速率，来计算 Gal LDH 活性。

组成：

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 40ml 蒸馏水，充分溶解。试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 5ml 蒸馏水，充分溶解。

自备仪器和用品：

台式离心机、可见分光光度计、1ml 玻璃比色皿、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆。13000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

Gal LDH 测定操作：

分光光度计预热 30 min，调节波长到 550nm，蒸馏水调零。

试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。

依次在 1ml 玻璃比色皿中加入 100μl 上清液、800μl 预热的试剂二和 100μl 试剂三，迅速混匀后于 550nm比色，记录 10s 和 130s 的吸光值A1 和A2，△A = A2﹣A1。

Gal LDH 活性计算公式：

按蛋白浓度计算

Gal LDH 活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原 1nmol Cyt c 为 1 个酶活单位。

Gal LDH (nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷（Cpr×V 样）÷T

=289×△A ÷Cpr

按样本质量计算

Gal LDH 活性单位定义：25℃中每克样品每分钟还原 1nmol Cyt c 为 1 个酶活单位。

Gal LDH (nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷（W×V 样÷V 样总）÷T

=289×△A ÷W

ε：还原型Cyt c 摩尔消光系数，17.3×103L/ mol/cm；d：比色皿光径(cm)，1cm；V 反总：反应体系总体积， 1ml=0.001 L；109：1mol=1×109nmol；V 样：加入反应体系中上清液体积，100μl=0.1ml；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/ml，蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司蛋白质含量 BCA 试剂盒；V 样总：加入提取液体积，1ml；W，样本质量，g；T：反应时间，2min。

注意事项:

试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。

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