利用酯酶催化胆gu醇酯水解生成游离胆gu醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆gu醇酯转化为 FC；进一步利用胆gu醇氧化酶催化FC 氧化，生成△4-胆甾烯酮和H2O2；最后利用过氧化物酶催化 H2O2 氧化 4-氨基安ti比林和酚，生成红色醌类化合物；在 500nm 有特征吸收峰，其颜色深浅与TC 含量成正比。
总胆gu醇含量测定试剂盒 脂肪酸系列

总胆gu醇（total cholesterol，TC）含量测定试剂盒说明书

微量法 100T/96S

总胆gu醇含量测定试剂盒 脂肪酸系列

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

TC 包括游离胆gu醇和胆gu醇酯。TC 是指组织中所有脂蛋白所含胆gu醇之总和。

测定原理：

利用酯酶催化胆gu醇酯水解生成游离胆gu醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆gu醇酯转化为 FC；进一步利用胆gu醇氧化酶催化FC 氧化，生成△4-胆甾烯酮和H2O2；最后利用过氧化物酶催化 H2O2 氧化 4-氨基安ti比林和酚，生成红色醌类化合物；在 500nm 有特征吸收峰，其颜色深浅与TC 含量成正比。

组成：

TC 标准品：液体 1ml×1 支，0.5μmol/ml，4℃保存。

自备仪器和用品：

水浴锅、可调式移液枪、酶标仪、96 孔板。

TC 的提取：

1、组织中TC 的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清，即TC 待测液。

2、细胞、细菌中TC 的提取：先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加 1ml 试剂一，超声波破碎 1min（强度 20％，超声 2s，停 1s），即TC 待测液。

3、血清（浆）等样品：直接测定。

测定操作：

/酶标仪预热 30 min，调节波长到 500 nm。

TC 工作液的配制：临用前，吸取约 0.8ml 试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中，充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中，充分混匀，TC 工作液置于 37℃水浴 10min。用不完的工作液 4℃保存一周。

标准管：依次在 96 孔板中加入 20μl FC 标准液和 180μl TC 工作液，混匀，37℃静置 3h 后于 500nm 测定A 标准管。

测定管：依次在 96 孔板中加入 20μl FC 待测液和 180μlTC 工作液，混匀，37℃静置 3h 后于 500nm 测定A 测定管。

空白管：依次在 96 孔板中加入 20μl 试剂一和 180μlTC 工作液，混匀，37℃静置 3h 后于 500nm 测定A测定管。

注意：标准管和空白管只需测定一次。

计算公式：

血清（浆）中TC 含量计算：

TC（μ mol /dL）=C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）×100

=50×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）

C 标准液：0.5μmol/ml；100 ml：1dL=100 ml。

组织中TC 含量计算：

按样本蛋白浓度计算

TC（μ mol / mg prot）= C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr

= 0.5×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr

按样本质量计算

TC（μ mol / g 鲜重）= C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W

= 0.5×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W C 标准液：0.5μmol/ml；样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g/ml

细胞、细菌中TC 含量计算：

TC（μ mol /104 cell）=C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷细菌或细胞（104 cell /L）

=0.5×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷细菌或细胞（104 cell /L） C 标准液：0.5μmol/ml。

最di检出限为 1nmol/ml。

总胆gu醇含量测定试剂盒 脂肪酸系列