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| 品牌 | NobleRyder/诺博莱德 | 货号 | BO6059 |
|---|---|---|---|
| 规格 | 100T/48S | 供货周期 | 现货 |
| 主要用途 | 具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害的研究热点 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药 |
土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒说明书
微量法 100T/48S
土壤几丁质酶试剂盒-常备现货
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理：
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在 585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
试剂组成和配制：
产品名称 | BO6059-100T/48S | Storage |
试剂一：液体 | 10ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 4ml | 4℃ |
试剂三：液体 | 65ml | 4℃避光 |
说明书 | 一份 | |
自备仪器和用品：
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板，甲苯、蒸馏水。
样品处理：
新鲜土样风干，过 30-50 目筛。
测定操作表：
对照管 | 测定管 | |||||||
土样（g） | 0.1 | 0.1 | ||||||
甲苯（μl） | 15 | 15 | ||||||
混匀，25℃静置 15min | ||||||||
蒸馏水（μl） | 100 | |||||||
试剂一（μl） | 100 | |||||||
混匀，37℃培养 24h | ||||||||
蒸馏水（μl） | 200 | 200 | ||||||
4000rpm，4℃，离心 10min，取上清 200μl 于新的EP 管中 | ||||||||
试剂二（μl） | 20 | 20 | ||||||
混匀，沸水浴 5min | ||||||||
试剂三（μl） | 600 | 600 | ||||||
混匀，37℃显色 20min，取 200μl 于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸馏水调零，测定 585nm 处吸光值，记为A 对照管和A 测定管，ΔA=A 测定管-A 对照管。 | ||||||||
计算公式：
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x 为标准品浓度（mg/ml），y 为吸光值ΔA。
酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V 反总÷W÷T×1000
= 598×（ΔA +0.0007）
V 反总：反应体系总体积，0.315ml；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：1mg/ml=1000μg/ml
用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=2.6357x-0.0007，R2=0.9989；x 为标准品浓度（μg/ml），y 为吸光值ΔA。
酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷2.6357×V 反总÷W÷T×1000
= 1195×（ΔA +0.0007）
V 反总：反应体系总体积，0.315ml；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：1mg/ml=1000μg/ml
注意事项:
试剂一充分混匀后再使用。
土壤几丁质酶试剂盒-常备现货
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