S-NAG 分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基ben酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG 活性。
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶试剂盒

土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）试剂盒说明书

微量法 100 管/48 样

土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶试剂盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

S-NAG 是溶酶体中的一种酸性水解酶，由土壤微生物分泌。S-NAG 活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理：

S-NAG 分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基ben酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG 活性。

试剂组成和配制：

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 10ml 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存。

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

样品处理：

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。

2、加样表：

混匀， 37℃振荡反应 1h 后，90℃水浴 5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却， 10000g 25℃离心 10min，取上清液（在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂）；

充分混匀，室温静置 2min 后， 400nm 处测定吸光值A，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设

一个对照管。

S-NAG 活力计算：

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.00645x -0.0054；x 为标准品浓度（μmol/L），y 为吸光值。单位的定义：每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活力单位。

S-NAG 活力（μmol/d/g 土样）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V 反总÷W÷T =55.81×(ΔA+0.0054)

T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积：3×10-4 L；W：样本质量，0.02g。

用 96 孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0043x -0.0054；x 为标准品浓度（μmol/L），y 为吸光值。单位的定义：每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活力单位。

S-NAG 活力（μmol/d/g 土样）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.0043×V 反总÷W÷T =83.72×(ΔA+0.0054)

T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积：3×10-4 L；W：样本质量，0.02g。mol/mg prot

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