采用 3，5-二硝基水杨酸法测定 DBE 催化支链淀粉产生的还原糖，通过测定还原糖含量的变化来计算DBE 活性。
淀粉脱分支酶试剂盒 淀粉系列

淀粉脱分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

淀粉脱分支酶试剂盒 淀粉系列

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

DBE 能够专一性地裂解支链淀粉的α-1，6 糖苷键，产生线性的葡萄糖链，在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用。

测定原理：

采用 3，5-二硝基水杨酸法测定 DBE 催化支链淀粉产生的还原糖，通过测定还原糖含量的变化来计算DBE 活性。

组成：

试剂二临用前每支加入 6mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 4℃保存；

自备仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

粗酶液制备：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长到 540 nm，蒸馏水调零。

2、加样表

混匀，37℃准确保温 2h

混匀，95℃水浴 5min，于 1mL 玻璃比色皿 540nm 处读取各管吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设个一个对照管。

注意：可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行 5min 95℃沸水浴处理。

DBE 活力单位的计算：

标准条件测定回归方程为y = 3.8458x - 0.165；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。

按照蛋白浓度计算

单位的定义：每mg 组织蛋白每h 催化产生 1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

DBE 活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T

=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr

按样本鲜重计算

单位的定义：每g 组织每分钟催化产生 1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

DBE 活力(mg /min /g 鲜重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总)÷T

=0.26× (ΔA+0.165) ÷W

V 反总：反应体系总体积，0.4mL； V 样：加入样本体积，0.2mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL； T：反应时间，2 h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

标准曲线线性范围为 0.1mg/mL-1mg/mL。 ΔA 线性范围为 0.01-2。

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