GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷an酸合成酶（GOGAT）共同参与谷an酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。
谷an酸脱氢酶试剂盒 氮代谢

谷an酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase，GDH）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

谷an酸脱氢酶试剂盒 氮代谢

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷an酸合成酶（GOGAT）共同参与谷an酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。

测定原理：

GDH 催化 NH4⁺ 、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷an酸和 NAD⁺，引起 340nm 吸光度下降。通过测定 340nm 吸光度的下降速率，计算 GDH 活性。

组成：

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1ml 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

在试剂二中加入 25ml 试剂一充分溶解混匀，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；

现配现用（配好后 12h 内用完）；

取 0.05ml 样本和 0.95ml 工作液于 1ml 比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时，在 340 nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度A1 和 5 分 20 秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。

GDH 活性计算：

1、血清（浆）中 GDH 活力的计算:

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=643×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算:

按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W

按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样÷V 样总×500) ÷T=1.286×ΔA

V 反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； V 样：加入样本体积，0.05 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

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