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| 品牌 | NobleRyder/诺博莱德 | 货号 | BD6011 |
|---|---|---|---|
| 规格 | 50T/24S | 供货周期 | 现货 |
| 主要用途 | 通过测定总巯基含量和GSH 含量,能够间接测定蛋白质巯基含量 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药 |
总巯基测定试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
总巯基测定试剂盒 抗氧
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
生物体内巯基主要包括谷胱gan肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和GSH 含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。
测定原理：
巯基基团与 5,5’- 二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有最大吸收峰。
组成：
产品名称 | BD6011-50T/24S | Storage |
试剂一：液体 | 40ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 2ml | 4℃避光 |
说明书 | 一份 | |
自备仪器和用品：
天平、研钵、可见分光光度计、恒温水浴锅、1ml 玻璃比色皿、乙醇和蒸馏水。
样品的制备：
按照组织质量（g）：水体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
血清，培养液：稀释 5 倍后测定，可取 0.1ml 样本，加入 0.4ml 蒸馏水，混匀，置冰上待测。
测定操作表：
1、分光光度计预热 30min，调节波长至 412nm，双蒸水调零。
2、操作表
在 1ml 玻璃比色皿中加入如下试剂
对照管 | 测定管 | |
样品（μl） | 200 | 200 |
试剂一（μl） | 750 | 750 |
试剂二（μl） | 50 |
乙醇（μl） | 50 | ||
混匀，25℃静置 10min， 测定 412nm 吸光值，ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。 | |||
计算公式：
总巯基标准曲线：y =3.6222 x- 0.0037，R2 = 1，x 为标品浓度，单位μmol/ml， y 为吸光度ΔA。
组织：
按样本重量计算
总巯基含量（μmol/g 鲜重）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×V 样总÷W
=0.276×（ΔA+0.0037）÷W
按样本蛋白浓度计算
总巯基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷3.6222×V 样总÷Cpr
=0.276×（ΔA+0.0037）÷Cpr
血清、培养液：
总巯基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×5×103
=1380×（ΔA+0.0037）
V 样总：加入提取液体积，1ml；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；5：血清，培养液等液体样本稀释倍数；103 ：1mmol/L=103μmol/ L
注意事项：
最di检出限为 10μmol/L。
总巯基测定试剂盒 抗氧
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