适用于快速提取各种真菌的总RNA，gDNA过滤器能高效滤除gDNA，提取的RNA，可直接用于RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、普通转录组测序、芯片等。
真菌总RNA提取试剂盒(带gDNA过滤器）

诺博莱德 真菌总RNA提取试剂盒(带gDNA过滤器）

Fungus Total RNA Mini Kit真菌总 RNA 提取试剂盒（含 gDNA 过滤器）

目录号：91515

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

室温（15~25℃）下，存放 12 个月，不影响使用效果。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

产品简介

适用于快速提取各种真菌的总RNA，gDNA过滤器能高效滤除gDNA，提取的RNA，可直接用于RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、普通转录组测序、芯片等。

产品特点

1. 无毒：免氯仿、免 β-巯基乙醇！

2. 高效：提取全过程仅需 20 min！

3. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

操作步骤

提示：

所有离心步骤均需要在室温（15~37℃）下进行。

第一次使用前请先在漂洗液 RW 中加入指ding量无水乙醇，详见瓶身的标签。

1. 材料处理：

a．转移 500 μl 裂解液 PRL 和 50 μl 糖酚去除剂 PAD 至 1.5 ml 离心管中，混匀备用。

注意：糖酚去除剂 PAD 是提取多糖、多酚、次级代谢产物多、色素含量丰富的困难样品不ke或缺的成分。对于简单样本，不加糖酚去除剂PAD，RNA 产量可能会提高一些。

b．液氮中研磨真菌组织成细粉，取≤50 mg 细粉转入上述装有 PRL 裂解液的离心管中, 剧烈涡旋震荡 30 sec，充分混匀。放离心管架上，接着研磨下一个样本。

（冬天气温低， 37℃摇床放置 3 min，可增强裂解效果，提高产量）

c． 将裂解物 13,000 rpm 离心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

注意：使用1 ml裂解液PRL和100μl糖酚去除剂PAD去裂解 100 mg 样品，RNA 产量会翻倍。

2. 小心吸取上清（一般 480 μl，注意不要吸到沉淀）转入一个新的 1.5 ml离心管中，加入 0.5 倍体积（一般 240 μl）的无水乙醇, 吹打混匀。

3. 每次转移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 过滤器中（过滤器放入收集管）， 13,000 rpm 离心 2 min，倒弃滤液。此时，绝大部分的 gDNA 被滤除，RNA 和少量 gDNA 残留被吸附在膜上。重复此过程，直到溶液全部转入 gDNA 过滤器。

4. 取出步骤 3 的 gDNA 过滤器，放入一个新的 2.0ml 离心管中，加入 500μl裂解液 PRL Plus，13,000 rpm 离心 1 min，收集滤液（RNA 在滤液中），加入 250 μl 无水乙醇，吹打混匀。

5. 将滤液混合物转入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 离心 2 min，此时，RNA被吸附在膜上，倒弃滤液。

6. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

7. 加入 500 μl 漂洗液 RW（检查是否已加乙醇），13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

8. 重复步骤 7。

9. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去膜上残留的乙醇。

10. 取出 RNA 吸附柱，放入 1.5 ml RNase-free 离心管中，向 RNA 吸附膜的中央悬空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。

11.提取的总 RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。

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