FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit 是专用于提取细菌（G+、G-）的总 RNA，采用高效的 gDNA 过滤器，不需要繁琐的 DNase I 消化过程。得到的 RNA，可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、测序、芯片等。
细菌总RNA提取试剂盒(带gDNA过滤器）

诺博莱德 细菌总RNA提取试剂盒(带gDNA过滤器）

FlashPure Plus Bacteria Total RNA Mini Kit细菌总 RNA 快速提取试剂盒（含 gDNA 过滤器）

目录号：91413

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

rong菌酶，常温运输， 4℃保存；其他组分，室温（15 ~ 25℃）保存。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

产品简介

FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit 是专用于提取细菌（G+、G-）的总 RNA，采用高效的 gDNA 过滤器，不需要繁琐的 DNase I 消化过程。得到的 RNA，可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、测序、芯片等。

产品特点

1. 无毒：免氯仿、免β-巯基乙醇！

2. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全过程仅需 10 min！

重要提示：

① 第一次使用前，请先在漂洗液 RW 中加入无水乙醇，详见瓶身的标签。

② 每次操作前，请先配制添加了rong菌酶或者 Lysostaphin 的 TE (PH 8.0)，终浓度为 1mg/ml。

③ 所有离心步骤均需要在室温（15~25℃）下进行。

操作步骤：

1. 离心收集 1 ~ 2 ml 菌液（10⁸ ~10⁹细胞）到一个 1.5 ml 离心管, 彻di吸弃上清。

2. 根据细胞的种类和数量，充分重悬细胞在 100 μl (5x10⁸细胞) / 200 μl

( 5x10⁸~7.5x10⁸ 细胞 ) TE 中（确保rong菌酶或者 Lysostaphin 已添加至 TE 中，浓度为 1mg/ml )，或者直接用 TE 重悬后，用干净枪头挑取少许rong菌酶加入。

3. 室温(15~25℃)温育5min/rong菌酶, 或者37℃温育15min/ Lysostaphin，破解细胞壁。每 2 min 涡旋振荡 10 sec，帮助破壁。

注意：各种细菌破壁的难易程度不一样，一般革兰氏阴性菌 E.coli 使用上面的条件就足够了，,甚至可能省略该步骤，但是某些革兰氏阳性菌如B. subtilis 难破壁需要提高rong菌酶浓度到 15mg/ml 和温育时间到10min。如果金黄色葡萄qiou菌需要加入 lysostaphin 到 1mg/ml，37℃温育 15min。总之不同细菌类型破壁难易程度不同，有的难破壁的种类需要根据用户自己的具体情况调节酶的种类、工作浓度和温育温度、时间，此外还可以联合使用玻璃珠击打，机械破壁，蛋白酶 K 消化等方法帮助破壁。

4. 短暂离心收集细菌，彻di吸弃上清后，加入 500 μl 裂解液 BRL Plus，涡旋震荡或者反复吹打，裂解细菌。

5. 将裂解匀浆液全部加到 gDNA 过滤器中（过滤器放入收集管中），13,000 rpm 离心 1 min，保留滤液，（RNA 在滤液中）。

6. 向滤液中加入等体积（通常为 500 μl）的 70%乙醇，立即吹打混匀。

7. 每次转移≤750 μl 滤液混合物至 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管)，13,000 rpm 离心 1 min，倒弃滤液。此时，RNA 被吸附在膜上，重复此过程，直到溶液全部上柱。

8. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1,室温放置 1min,13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

9. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

10. 重复步骤 7。

11. 把 RNA 吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，彻di除去膜上的乙醇。

12. 取出 RNA 吸附柱，放入新的 RNase-free 1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加 30-50μl RNase-Free H2O（事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量），室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。

13. 得到的 RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。

附录：

一、免液氮直接研磨（自动研磨仪）——适用于新鲜样本

a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中加入 4 mm 两粒，加 600 μl 裂解液 ARL plus，放进 20 mg 左右的样本，设置 65 个频率，震荡 2 min。

b. 将裂解物 13,000 rpm 离心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。

二、液氮研磨（自动研磨仪）:

a. 把研磨模块丢到液氮中预冷，直到没有气泡冒出视为预冷完毕。

b. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3mm 钢珠 3 粒，放进 20-30mg 样本，

投入液氮中预冷。

c. 把预冷好的离心管插入研磨模块中，放进研磨仪，设置 55 个频率，震荡 30~60 sec。（以北京赫得研磨仪——京 N9548 为例）

d. 研磨完成后，马上加 600 μl 裂解液 ARL Plus，剧烈涡旋振荡,充分混匀。

e. 将裂解物 13,000 rpm 离心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。

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