碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。
碱性磷酸酶染色试剂盒偶氮偶联法

NobleRyder G9268 碱性磷酸酶染色试剂盒(偶氮偶联法)Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)

产品货号：G9268

产品名称：碱性磷酸酶染色试剂盒(偶氮偶联法)，Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)

产品规格：4*2ml/4*10ml/4*20ml

碱性磷酸酶染色试剂盒偶氮偶联法

产品简介：

中文名称：碱性磷酸酶染色试剂盒(偶氮偶联法)

英文名称：Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)

规格：4*2ml ; 4*10ml ; 4*20ml

储存条件：-20℃，避光保存，有效期6个月。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

碱性磷酸酶染色试剂盒(偶氮偶联法)，Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)产品介绍

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。

碱性磷酸酶染色试剂盒(偶氮偶联法)采用偶氮偶联法来显示碱性磷酸酶活性，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使底物水解，原位释放萘fen与呈色偶氮染料生成不溶有色产物，定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片等的碱性磷酸酶染色，活性部位呈蓝色，位于胞浆 ，结果较金属盐沉淀法准确。

自备材料：

载玻片、湿盒、普通光学显微镜

操作步骤：(仅供参考) 试剂(C): 核固红染色液可能会由于絮凝产生悬浮物或少量沉淀，建议取上清使用或沸水浴5-10min后晾至30-40℃使用。（见注意事项3）

(一) 样本处理：

1、 细胞涂片：取新鲜全血或骨髓制备涂片，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至均匀铺开为止，自然晾干。

2、 贴壁培养细胞、细胞爬片：吸去培养基，1×PBS清洗3-4次，沥去多余水分。取出细胞爬片。

3、 冰冻切片：从冰箱取出放置恢复室温，浸入蒸馏水清洗1-2min，沥去多余水分。

(二) 染色孵育：

1、使用2-8℃预冷的ALP固定液固定30s-3min，多数情况下30-60s即可。（见注意事项2）

2、蒸馏水洗，沥去多余水分(不宜过分干燥)。

3、（切片处理）滴加ALP孵育液覆盖切片，置于湿盒内37℃温箱孵育15-20min，蒸馏水洗。

4、 （贴壁细胞）滴加 ALP孵育液覆盖细胞，置于37℃温箱孵育15-20min，蒸馏水洗。

5、复染：核固红或甲基绿复染液染色3-5min，对于冰冻切片，一般染色1-2min即可。

(三) 封片观察：

1、（切片处理）蒸馏水稍洗，沥去多余水分，滴加水性封片剂封片后镜检观察。

2、（贴壁细胞）蒸馏水稍洗，可带水或1×PBS镜下观察。

注意事项：

1. 血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。

2. 对于培养细胞和细胞爬片，如果固定后有细胞漂浮现象，可以使用4%多聚甲醛代替ALP固定液进行固定处理，室温固定10-15min。

3. 试剂(C): 核固红染色液为胶体性质溶液，低温（低于25℃）保存或长期储存由于絮凝产生悬浮物或少量沉淀，属于正常现象，一般不影响使用。如移液器吸取观察到明显浑浊，可拧紧瓶盖沸水浴5-10min重新制备分散均匀的胶体溶液来恢复使用。

4. 培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。

5. ALP 孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。

6. 复染时，核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。

7. 每次染色时，应有阳性对照片。

碱性磷酸酶染色试剂盒偶氮偶联法 

产品订购信息：

NobleRyder G9268 碱性磷酸酶染色试剂盒(偶氮偶联法)，Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)  4*2ml/4*10ml/4*20ml