高纯度质粒小提试剂盒（离心柱型）核酸提取：本试剂盒用于高纯度质粒DNA的小量制备。菌体经碱裂解、高盐、低pH处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心吸附柱吸附。通过清洗液的洗涤可去除杂质，在低盐、高pH条件下洗脱，最后得到纯度较高的质粒 DNA。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、RT-qPCR、测序及转染等分子生物学实验。

诺博莱德 高纯度质粒小提试剂盒（离心柱型）核酸提取

HiPure Plasmid Mini Kit高纯度质粒小量快速提试剂盒

目录号：31013

高纯度质粒小提试剂盒（离心柱型）核酸提取产品内容：

保存条件：

在室温(15~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月。加入RNaseA后的溶液P1应置于 2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月,如果P1中RNase A失活，重新补加即可。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

产品简介：

本试剂盒用于高纯度质粒DNA的小量制备。菌体经碱裂解、高盐、低pH处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心吸附柱吸附。通过清洗液的洗涤可去除杂质，在低盐、高pH条件下洗脱，最后得到纯度较高的质粒 DNA。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、RT-qPCR、测序及转染等分子生物学实验。

产品特点：

1.得率高：1.5-4.5ml可提出多达10–20ug的纯净质粒；

2.纯度高：沉淀致密，去杂质彻di干净；

3. 高效：操作简便，快捷，节约时间。

注意事项：

1.使用前请先检查平衡液、溶液P2和溶液P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。

2.细菌培养时间一般为12~16小时，过度培养会降低质粒质量甚至导致质粒DNA突变；

3.注意溶液P1，P2和P3的用量比例，若细菌量增大，需按比例放大这些溶液的使用量；

4.随菌体增多应延长溶液 P2 的作用时间，直至溶液成粘稠透明状，但时间过长会导致质粒DNA变性。

5.质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关，一般1.5ml过夜培养菌体可收获约10ug高拷贝质粒。

重要提示：

一、第一次使用前请先在去蛋白液PE、漂洗液WB中加入指ding量无水乙醇（见瓶身标签），充分混匀，并做好标记，以免多次加入。

二、首ci使用时请先将 RNaseA全部加到溶液P1中，混匀，每次使用后置于2~8℃保存。

操作步骤：

1.  柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入100ul的平衡液，12,000rpm离心1min，弃收集管中滤液，将吸附柱重新放回收集管中。

2.取1~5ml过夜培养的菌液，室温12,000rpm离心30sec，尽量倒干上清，收集菌体。

（注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取1.5ml菌液离心即可，浓度低时可多收集一次）

3. 加入250ul溶液P1，重悬菌体沉淀，涡旋震荡至彻di悬浮。

（注意：如有未彻di悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）

4. 加入250ul溶液P2，温和地上下翻转6-8次，使菌体充分裂解，室温放置4min。

（注意：不可剧烈震荡，以免造成基因组 DNA 片段的污染，所用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏，如未完quan变得清亮，可能是菌体太多，可增加溶液P2的用量，在后续的操作中溶液P3的用量也要相应增加）

5.加入350ul溶液P3，立即温和地上下翻转6-8 次，充分混匀时会出现白色絮状沉淀，然后室温12,000rpm离心10min。

（注意：加入溶液P3后应立即混合，避免产生SDS的局部沉淀）

6. 将上清液转移到吸附柱中，室温12,000rpm离心1min，质粒被吸附在膜上，弃滤液。

7.可选步骤：向吸附柱中加入500ul去蛋白液PE，室温12,000rpm离心1min，弃滤液。

（注意：去蛋白液PE为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）

（注意：如果宿主菌是endA-，如DH5α，此步骤可省略。如果宿主菌是 endA+，如 TG1、BL21、 HB101、JM101等，此步骤不可省略，因这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒。如果提取低拷贝质粒也推荐采用此步骤）

8. 加入600ul漂洗液 WB，室温12,000rpm离心30sec，弃滤液。

（注意：漂洗液WB为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）

9. 重复步骤8一次。

10.   室温12,000rpm离心2min，甩干残留液体。

（注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用）

11.  将吸附柱置于一个新的1.5 ml离心管（自备）中，加入50~100 ul的洗脱缓冲液EB，室温放置2 min，12,000 rpm离心1 min，离心管底溶液即质粒DNA。

（注意：事先在 65~70℃水浴中预热洗脱缓冲液EB，可增加洗脱效率；如果需要较多量质粒，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，再次离心1min 收集；如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0 -8.5之间。）

低拷贝或大质粒（>10kb）提取

如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，使用 5~10ml过夜培养物，同时按照比例增加溶液P2、P2、P3的用量，脱缓冲液EB应在65℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当延长时间，以增加提取效率，其它步骤相同。