诺博莱德 凝固全血基因组DNA提qu系统 核酸提取

凝固血液基因组DNA提qu试剂盒（溶液型）

目录号:40311

产品内容：

自备试剂：

异丙醇、70％乙醇

保存条件：

室温（15~25℃）

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

产品简介：

适用于从凝固血液样本中快速提取高质量的基因组DNA。

首先细胞核裂解液配合蛋白酶K裂解凝固血kuai释放出基因组DNA， 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA在Sigma的分子生物学级Glycogen的助沉下通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

产品特点：

1.  简便快速：30min内可获得高纯度的基因组DNA。

2.    安全无毒：无需ben酚/氯仿抽提。

3.    高产：典型的产量1ml全血可提取出10～30µg基因组DNA。

4. 高纯：OD260/280=1.7～1.9，长度可达50～150kb，可直接进行可直接用于构建文库、PCR、酶切、Southern-blot 等分子生物学实验。

注意事项：

1.   本试剂盒可运用于多种抗凝剂的全血，如EDTA、柠檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬，影响裂解效果，建议选用非肝素的抗凝剂收集血液标本。

2.    为了优良效guo，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。

3.   不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，血液DNA产量的个体差异也可能非常大。

4.   如果结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。

5.    本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量（20µl-10ml），请联系我们索取其它处理量的操作手册。

6.    DNA溶解液是TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0），长期保存DNA，但是EDTA可能下游酶切反应，使用时可以适当稀释。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。

操作步骤：

1. 加入■50μl凝固血液至一个1.5ml离心管或◆1ml凝固血液至一个

50ml离心管，剧烈涡旋或者用手剧烈拍打离心管帮助打散凝血kuai。

2.  加入■550μl或◆11ml 细胞核裂解液，吹打混匀，再加入■3μl或◆

60μl蛋白酶K(20mg/ml)，颠倒混匀25次。

3.  55℃放置3小时至过夜，直到所有的凝块完quan融解。

4.   可选步骤（一般不需要做）：加入■3μl或◆60μlRNaseA（4mg/ml），在裂解物中加入RNaseA（10mg/ml）至终浓度30μg/ml，颠倒25次混匀，37℃温育15分钟去除残留RNA。

5.  将裂解物迅速冷却到室温（可置冰上一分钟）。

6.  加入■200μl或◆4ml蛋白沉淀液，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀

25秒，混匀后可能见到一些小的蛋白团块。

注意：液体确实要旋转着振荡起来，而不仅仅是上下振动，这样混匀效果和沉淀蛋白效guo优良。

7. 置冰上■5分钟或◆10分钟。

8.  ■13,000-16,000xg离心5分钟或◆2,500xg(可根据需要调整加大离心力)离心10分钟。这时候应该可以见到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

9.  小心吸取上清到一个新的■1.5ml离心管或◆50ml离心管中。

注意：吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2分钟后取上清。

10.加入■600μl的室温异丙醇和1μlGlycogen溶液或◆12ml室温异丙醇和20μlGlycogen溶液，轻柔颠倒50次混匀或者直到出现棉絮状（丝状）白色DNA沉淀。（注意：处理样品量大的时候才可能看见丝状沉淀，处理样品量少或者保存质量不好的时候往往看不见。）

11. ■13,000-16,000xg离心1分钟或◆2,500xg离心3分钟，这时候应该看到管底白色的DNA沉淀。

12. 小心弃上清，倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇（注意不要丢失沉淀）。

13.加入■600μl或◆12ml70%乙醇，颠倒几次漂洗DNA沉淀。

14. ■13,000-16,000xg离心1分钟或◆2,500xg离心1分钟,倒去上清（沉淀很松，注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。

注意：不要干燥过头，否则DNA极其难溶；也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。

15.加入■20μl或◆250-400μl TE 缓冲液(或者客户根据需要选择的缓冲液)重新水化溶解DNA 沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在 65℃温育 30-60分钟（不要超过一小时），也可以在室温或者 4℃放置过夜来重新水化 DNA，中间不时的轻弹管壁帮助重新水化 DNA。

16. DNA 可以存放在 2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

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