诺博莱德 小量全血基因组DNA快速提qu试剂he核酸提取

FlashPure Blood Genomic DNA Kit血液基因组DNA提qu试剂he（离心柱型）

目录号:40011

产品内容：

自备试剂：

无水乙醇，RNase A（可选）

保存条件：

室温（15~25℃）

蛋白酶K，室温可保存6个月，4℃保存12个月，~20℃保存2年。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

产品简介：

适用于从新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液样本中快速提取高质量的基因组DNA，也可以提取白膜层和血凝块。

本试剂盒采用独te的裂解液，利用硅胶膜特异吸附DNA，无需酚氯仿等有毒试剂，也无需进行耗时的醇类沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性杂质，得到基因组DNA，无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。

产品特点：  

1.  简便快速：30min内可获得高纯度的基因组DNA。

2. 安全无毒：无需ben酚/氯仿抽提。

3. 高产：典型的产量200µl全血可提取出3～6µg基因组DNA，

4.高纯：OD260/280=1.7～1.9，长度可达30～50kb，可直接进行PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。

注意事项：

1. 如果结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。

2. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。

3. 为了最佳效guo，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。

4. 不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。

5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH8.0），但是EDTA可能下游酶切反应，使用时可以适当稀释

操作步骤：

第一次使用前，请先在漂洗液WB中加入指ding量无水乙醇，详见瓶身的标签。提示：所有离心步骤必须在室温（15~25℃）下进行。

1. 柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入100μl平衡液，

12,000rpm离心1min，弃滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）

2. 取200μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，放入1.5ml离心管。

▲如果血液起始量小于200μl，则用1×PBS补足到200μl。

如果起始量介于200μl-300μl之间，则需要按照比例增加试剂用量。如果起始量介于300μl~1 ml之间，则需要先进行红细胞裂解操作:将10x红细胞裂解液用灭菌水稀释到1x，然后在样品中加入3倍体积的1x红细胞裂解液，颠倒混匀，室温放置10 min，期间再颠倒混匀几次。13,000rpm离心20sec(对于1.5ml离心管)2,000~3,000rpm离心5min(对于15ml离心管)，吸去上清，留下白细胞沉淀（如果看到的是大部分的红色细胞团，则再次加入3倍1x红细胞裂解液，重复裂解一次），加入200μl1×PBS，振荡至彻di悬浮。

▲提取凝固血时需要在操作前用枪头捣碎血凝块后按照正常步骤进行。

▲如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量仅用5~20μl，可加1×PBS补足到200μl后，进行下面的裂解步骤。

3. （可选，一般不需要）如果需要去除RNA，可向200μl 的血液样品中加入5μlRNaseA(100mg/ml)溶液，振荡混匀，室温放置5~10min。

4. 加入20μl蛋白酶K溶液，充分振荡混匀。

5. 加入200μl结合液CB，充分振荡混匀，70℃放置10 min，期间颠倒混匀几次，溶液应该变清亮，但颜色偏黑。（如果未变清亮，请延长时间）

6. 冷却后加100μl无水乙醇(或异丙醇)，充分振荡混匀，此时可能会出现絮状沉淀，短暂离心以去除管盖内壁水珠。

7. 将所得溶液和絮状沉淀加入一个DNA吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）

13,000rpm离心1min，DNA被吸附在膜上，倒弃滤液。

8.加入500μl抑制物去除液IR，13,00rpm离心30sec，倒弃滤液。

9. 加入600μl漂洗液WB（请检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm离心30sec，倒弃滤液。

10. 重复步骤9一遍。

11. 将DNA吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm离心2 min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

12.取出DNA吸附柱，放入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中央加入100μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在80 ~ 100℃水浴中预热可以提高产量），室温放置3~5min，13, 000rpm离心1min。

▲可将第一次洗脱所得的DNA溶液重新加入离心柱中，室温放置 2 min，13,000rpm离心1min。可以提高浓度10%左右。

13. DNA可以存放在2~8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。

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