本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。
通用RT-PCR试剂盒(M-MLV) 核酸电泳

NobleRyder RP9988 通用RT-PCR试剂盒(M-MLV) Universal RT-PCR Kit(M-MLV)

产品货号：RP9988

产品名称：通用RT-PCR试剂盒(M-MLV) Universal RT-PCR Kit(M-MLV)

英文名称：Universal RT-PCR Kit(M-MLV)

产品别名：通用RT-PCR试剂盒(M-MLV) 反转录试剂盒

产品规格：25T/50T/100T

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV) 核酸电泳

产品简介：

储存条件：Store at -20℃，1 year.

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder RP9988 通用RT-PCR试剂盒(M-MLV) 本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配制的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的M-MLV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)产品简介

莫洛尼鼠白血病病毒反转录酶（M-MLV RT）是一种RNA依赖的DNA聚合酶，能使mRNA（>5kb）转录为cDNA。M-MLV RT的RNase H活性相对于禽成髓细胞瘤病毒反转录酶较弱，更适合用来反转录较长的mRNA。M-MLV RT应用于以RNA为模板合成cDNA的第一条链。

注意：M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反转录酶，因此要得到和用AMV 反转录酶一样产量的cDNA需加入更多单位的M-MLV反转录酶。

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)使用方法

1）使用方法简介以用2mg总RNA为例。在无RNase离心管中，加入0.5mg引物至含总RNA的样品中，总体积不大于15ml。70℃，5分钟打开模板链形成的二级结构。立即放于冰上降温防止二级结构恢复，随后短暂离心使液体集中在离心管底。

2）加入以下成分到已退火后的引物-模板混合物中。

注意：不要改变引物的加入比率。

M-MLV 5×Reaction Buffer：5ml

dATP，10mM：1.25ml

dCTP，10mM：1.25ml

dGTP，10mM：1.25ml

dTTP，10mM：1.25ml

Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor：25 units

M-MLV RT：200 units

无核酸水至最后体积 25ml

3）轻轻混匀离心管，如果使用随机引物在37℃孵育60分钟，其他引物则42℃孵育。延伸温度在37～42℃之间优良。

4）M-MLV RT 用于合成cDNA的第一链。往后的合成则需要根据需要自行设计引物再次合成。

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)Buffer组成

M-MLV RT 5×Reaction Buffer

250mM Tris-HCl（PH 8.3 室温下）

375mM KCl

15mM MgCl2

50mM DTT

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)来源

大肠杆菌表达纯化

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)保存条件

-20℃保存。避免经常冻融。

操作步骤（仅供参考）：

一、反转录反应

关于逆转录引物的选择：

（1）如果模板为真核生物来源，建议用Oligo(dT)16 ，Oligo(dT)16可以与真核生物mRNA 的3’Poly A 尾配对，可获得高产量的全长cDNA。

（2）模板为原核生物RNA的反转录请选用Random引物或者基因特异性引物。

（3）Random引物适用于mRNA、tRNA 和rRNA 等所有RNA的反转录反应，对物种没有限制，病毒、细菌、植物、动物等都可使用。

1、在冰浴的无RNase的离心管中加入如下反应成分：

1-5μg 总 RNA或50-500ng mRNA

2μLOligo(dT)16或 2μLRandom 或 2pmole 基因特异性引物

补RNase-free ddH2O 至 14.5μL

2、70℃保温5min后迅速在冰上冷却2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：

4μL：5×M-MLVBuffer

1μL：dNTPs

0.5μL：RNasin

1μL：M-MLV

 3、42℃温浴60min，如果是用Random引物，请先将离心管置25℃温浴10min，再42℃温浴60min。

4、95℃加热5min终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。

5、用RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到50μL，取2-5μL进行PCR反应。

二、PCR反应

2、混匀后短暂离心，PCR仪扩增，琼脂糖凝胶电泳观察结果。

注意事项：

1、用于cDNA合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。

2、试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期12个月。

3、RNA样品要避免反复多次冻融，应使RNA在冰浴中处于融化状态。

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV) 核酸电泳

产品订购信息：

RP9988  通用RT-PCR试剂盒(M-MLV) Universal RT-PCR Kit(M-MLV)  25T/50T/100T