真菌是具有真核和细胞壁的异养生物，种属很多，已报道的属达1万以上，种超过10万个。真菌通常又分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。对于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，而对于大型真菌，可直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液，用硅质膜吸附，即可得到高纯度的基因组。
真菌基因组DNA提取试剂he 质粒提取

真菌基因组DNA提取试剂he 质粒提取

NobleRyderD0188  真菌基因组DNA提取试剂he Fungi Genomic DNA                   Extraction Kit 

产品货号：D0188

产品名称：真菌基因组DNA提取试剂he Fungi Genomic DNA Extraction Kit

英文名称：Fungi Genomic DNA Extraction Kit

产品规格：50T/100T

产品简介：

储存条件：酶附件-20℃，其它试剂RT，复检期1年

NobleRyderD0188  真菌基因组DNA提取试剂he真菌是具有真核和细胞壁的异养生物，种属很多，已报道的属达1万以上，种超过10万个。真菌通常又分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。对于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，而对于大型真菌，可直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液，用硅质膜吸附，即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的DNA，可以直接用于 PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游应用实验。

本试剂盒适用于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，经过前期处理的菌液，用硅质膜吸附，即可得到高纯度的基因组。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

操作步骤（仅供参考）：

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签（每瓶需要单独添加45mL无水乙醇）。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、样品处理：

1）对于酵母菌，取1-2mL培养好的菌液，离心收集，弃上清。加入200μL溶液A，加入2μLRNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5-10min。

2）霉菌(孢子也可相同处理)：取50-100mg菌丝，加200μL溶液A，用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝，加入2μL RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约30min。

3）大型真菌（建议）：称取100-200mg样品，倒入适量的液氮，立即研磨重复3次，使样品研成粉末，加400μL的CTAB裂解液，加入2μL RNase A，再加入100mg 玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5min，后续再采用本试剂盒继续提取。

2、 加入20μL的蛋白酶K，充分混匀，55℃水浴消化30min，消化期间可颠倒离心管混匀数次。 12000rpm离心2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀，可再次离心。

3、在上清中加入200μL溶液B，充分混匀。如出现白色沉淀，可放55℃水浴5min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不che底，可能导致提取的 DNA量少及不纯，还有可能导致上柱后堵柱子，请增加消化时间。

4、再加入200μL无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，放置2min。

5、12000rpm 离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

6、向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入600μL漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm 离心2min，将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200μL经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。

10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心2min，即可得到高质量的基因组DNA。

注意事项：

1. 由于真菌种类万千，对于一些特别难处理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振荡，蛋白酶K处理，一般都可以得到一定量的基因组DNA，如电泳检测很弱，一般PCR都会有较好结果。

2. 若溶液A或溶液B中有沉淀，可在55℃水浴中重新溶解。

3. 如果DNA提取量很少，可加长玻璃珠处理时间，如果提取DNA成弥散短条带，可减少玻璃珠处理时间。

4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50μL，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

5. DNA 浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50 μg/mL双链DNA、40 μg/mL 单链 DNA

OD260/OD280比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

真菌基因组DNA提取试剂he 质粒提取

产品订购信息

D0188  真菌基因组DNA提取试剂he Fungi Genomic DNA Extraction Kit  50T/100T