在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与1分子的CO2结合，产生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使还原型辅酶I（NADH）氧化。因此，340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶I氧化速率，还原型辅酶I氧化速率可反应Rubisco的活性。
二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性试剂盒光合

NobleRyder BC8223  二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性检测试剂盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

产品货号：BC8223

产品名称：二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性检测试剂盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

产品规格：100T/96S

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性试剂盒光合

产品简介：

中文名称：二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性检测试剂盒

英文名称：Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

规格：100T/96S

检测方法：微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

储存条件：Store at -20℃，6 months

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder BC8223二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性检测试剂盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

测定原理：

在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与1分子的CO2结合，产生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使还原型辅酶I（NADH）氧化。因此，340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶I氧化速率，还原型辅酶I氧化速率可反应Rubisco的活性。

需要的仪器，耗材：分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定意义：

核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO2的固定，同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。

测定原理：

在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与1分子的CO2结合，产生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使还原型辅酶I（NADH）氧化。因此，340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶I氧化速率，还原型辅酶I氧化速率可反应Rubisco的活性。需要的仪器，耗材：分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

产品说明：

1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(Rubisco,EC4.1.1.39)是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO2的固定，同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。

在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)与1分子的CO2结合，产生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA)：PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，伴随着NADH氧化生成NAD*：在340nm NADH有特征吸收峰，而NAD+没有此吸收峰，因此测定340nm吸光度下降速率可以代表Rubisco的羧化酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1、细菌或细胞样本的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清：按照每500万细菌或细胞加入lmL提取液，超声波破碎细菌或细胞(功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次)：10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。建议选取新鲜的植物样本。

二、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

三、Rubisco活性计算

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1.按样本蛋白浓度计算

单位的定义：25C中每毫克蛋白每分钟氧化1nmolNADH为一个酶活力单位。

Rubisco活力(U/mg prot) =[AAxV反总÷(εxd) x10°]+(CprxV样) +T =344x△A+Cpr

2.按样本质量计算

单位的定义：25℃中每g组织每分钟氧化1nmolNADH为一个酶活力单位。

Rubisco活力(U/g质量)=[ΔAxV反总÷ (εxd) x10°]÷(V样÷V样总xW)+T=344xΔA+W

3.按细菌或细胞数量计算

单位的定义：25C中每1万个细菌或细胞每分钟氧化1nmolNADH为一个酶活力单位。

Rubisco活力(U/104cell) =[ΔAxV反总÷ (εxd) x10°]÷(V样÷V样总x500)÷T=0.69x△A

V反总：反应体系总体积，2.14x10-L;ε：NADH摩尔消光系数，6.22x103L/molcm;d：微量石英比色皿光径，

1cm：V样：加入样本体积，0.02mL：V样总：加入提取液体积，1mL;T：反应时间，5min;W：样本质量，g;500：细胞或细菌总数，500万;109：单位换算系数，Imol=10°nmol。

b.使用96孔UV板测定的计算公式如下：

将上述公式中光径d-1cm改为d-0.6cm(96孔UV板光径)进行计算。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性试剂盒光合 

产品订购信息：

BC8223二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性检测试剂盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit 100T/96S