是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含I0多个成员。Caspase-3 是凋亡过程中最主要的终末蛋白酶,也是研究最多 caspase;它激活 pro-caspase-2,6,7,9特异水解多种关键凋亡蛋白如PARP，介导染色质固缩、凋亡小体生成、核 DNA 断裂。
Caspase-3活性检测试剂盒 细胞凋亡

NobleRyder BC1618 Caspase-3 活性检测试剂盒Caspase-3 Activity Assay Kit

产品货号：BC1618

产品名称：Caspase-3 活性检测试剂盒Caspase-3 Activity Assay Kit

英文名称：Caspase-3 Activity Assay Kit

产品规格：50T/100T/20T

Caspase-3活性检测试剂盒 细胞凋亡

产品简介：

检测方法：比色法 Colorimetric

储存条件：Store at -20℃，6 months

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder BC1618 Caspase-3 活性检测试剂盒Caspase-3 Activity Assay Kit是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含I0多个成员。Caspase-3 是凋亡过程中最主要的终末蛋白酶,也是研究最多 caspase;它激活 pro-caspase-2,6,7,9特异水解多种关键凋亡蛋白如PARP，介导染色质固缩、凋亡小体生成、核 DNA 断裂。

测定原理基于Caspase-3 特异水解多肽底物 DEVD-pNA(Asp-Gu-Val-Asp-p-nitroanilide),释放的游离硝基苯胺 pNA在: 405nm 有最大吸收峰。采用可见光光度比色法测定pNA而得到Caspase 活性。适用于检测哺乳动物组织、细胞 Caspase-3 活性。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、100mL玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.培养细胞:先收集细胞到离心管，离心后弃上清:按照细胞数量(约106个)加 100L 试剂二(若裂解不充分可提高至 150-200μL),震荡重悬沉淀，置冰上静置15 min,15000g49C离心 10-15min,取上清置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):试剂二体积(mL)为1:5-~10的比例(建议称取约01g组织，加入1mL试剂二)，冰浴研磨或充分剪碎，置冰上静置15min，4℃，15000g离心10-15min，取上清置冰上待测。

二、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至405nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、标准溶液的稀释:将5mmolLpNA 标准品用标准品稀释液稀释至 200、100、50、25、12.5、0umolL,的标准溶液备用。

注意事项:

1、由于试剂二中含有还原剂(DTT)，建议将样本用水稀释2倍后，用Bradford 法测定蛋白浓度，以降低 DTT对蛋白浓度测定的下扰。不建议使用 BCA法测定蛋白浓度。

Caspase 活性测定值低最常见的原因是细胞未发生凋亡或细胞量太少，其次是观测时间不恰当。诱导凋亡时，2、并非剂量越大时间越长 Caspase 活性就越高。建议设置不同剂量和时间点如0、2、4、8、16、24小时，以检测优良的观察点。

3、所测样本的值高于标准曲线上限shi，可用试剂二稀释样本后重新测定。

4、盖紧 96 孔板盖子并用封口膜密封。37℃孵育，肉眼可见颜色变黄时的OD405值约为0.2，此时即可测定。颜色变化不明显可延长反应或过夜，但酶活性较强时，孵育时间过长将导致反应失去线性关系。

Caspase-3活性检测试剂盒 细胞凋亡 

产品订购信息

BC1618 Caspase-3 活性检测试剂盒Caspase-3 Activity Assay Kit  50T/100T/20T