Mag NHS和 Magrose NHS都是表面为NHS基团修饰，能够与带有伯胺基团的蛋白和其他分子形成稳定的肽键，用于亲和纯化抗体、抗原和其他生物分子。
NHS磁珠Mag NHS-常备现货

NobleRyder M0238 NHS磁珠Mag NHS NHS magnetic beads

NHS磁珠Mag NHS-常备现货

产品货号：M0238

产品名称：NHS磁珠Mag NHS NHS magnetic beads

英文名称：NHS magnetic beads

产品规格：1ml/5ml

产品简介：

说明：10mg/mL

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder M0238 NHS磁珠Mag NHS NHS magnetic beads

Mag NHS和 Magrose NHS都是表面为NHS基团修饰，能够与带有伯胺基团的蛋白和其他分子形成稳定的肽键，用于亲和纯化抗体、抗原和其他生物分子。与传统的羧基、an基磁珠相比，表面含NHS基团的磁珠无需事先采用EDC/NHS 或戊二醛进行活化，只需简单地将含伯氨基的生物配体溶解在试剂盒自带的Coupling Buffer 中，室温下将蛋白与NHS磁珠混合1~2h便可将生物配体共价偶联到磁珠上，具有操作简单、偶联条件温和、生物配体偶联快速高效等优点。磁珠偶联过程必需在不含任何氨基的缓冲溶剂中进行。人工操作时，使用磁性分离架实现磁珠与溶剂分离。也可采用自动化设备操作，自动化操作适合用于多样品的筛选。

蛋白偶联操作流程及优化点（仅供参考）

1.蛋白溶液的配制

2.磁珠的洗涤

3.蛋白偶联：（优化）

(1) Coupling Buffer 的种类。首先通过实验确定最合适的CouplingBuffer

 (2) 确定合适的 CouplingBuffer 后，再通过实验优化蛋白溶液的浓度

4.封闭

5.磁珠保存

6.注意事项：

(1) 其中磁珠洗涤要严格按照说明书采用冷却的 WashingBufferA快速洗涤 ，以防磁珠在洗涤过程中 NHS 基团水解；

(2) 蛋白偶联过程中，首先要通过实验确定合适的 CouplingBuffer（主要包括 CouplingBufferA、Coupling Buffer B、50mM 硼酸溶液，pH8.5、100mM磷酸缓冲液，100mMNaCl，pH7.4 这四种）

(3) 确定合适的 CouplingBuffer 后，再以此 CouplingBuffer 为基础，确定合适的偶联蛋白浓度，因为蛋白浓度越高，偶联到磁珠上的蛋白的量会越大（这是由于 NHS 基团跟蛋白偶联和 NHS基团本身水解是一对竞争反应）。当然此处要综合考虑使用性能和成本，有些客户偶联少量的蛋白便可满足使用需求，这时采用低浓度的蛋白便可，这样可以降低成本。

(4) 封闭这一步可以采用试剂盒中自带的 3M 乙醇胺，也可使用 Tris 缓冲液（100mMTris-HCl,150 mMNaCl, pH 8.0），封闭时间不得低于 2h，如果化学封闭后背景仍然很高，还可以额外加一步 BSA 封闭。

蛋白偶联操作步骤（仅供参考）

一、使用前准备

以下操作过程以取磁珠样品 500μL，采用 1.5mLEP 管为例介绍。用户可根据自身需求按比例调整：

1. 蛋白溶液配制：

取适量待偶联蛋白用 CouplingBuffer 溶解，配成浓度为0.1-3.0mg/mL 的蛋白溶液。已经保存于 buffer 中的蛋白，需要通过透析或者脱盐的方法彻di除去原有 buffer 里含伯胺基的物质，然后

再用 CouplingBuffer 配成浓度为0.1-3.0 mg/mL 的蛋白溶液，将配制好的蛋白溶液于 4ºC 保存备用。

注： (1)为了达到更好的性能，蛋白浓度≥2.0mg/mL，这样偶联效率会更高，此处需综合考虑成本和使用要求；

(2)蛋白溶液中不能含有带伯氨基的成分，比如Tris，甘an酸，明胶，BSA 等；

2.磁珠清洗：

(1) 取 500μL 磁珠于 1.5mLEP 管中。

注：磁珠取样前要反复颠倒、使用涡旋振荡器使其混合均匀，以保证实验的同一性。

(2) 将 EP管置于磁性分离架内，富集磁珠，去除上清液。

(3) 加 1mL2~8ºC 预冷的WashingBufferA于1.5mLEP管中，涡旋15s，使磁珠混合均匀。

(4) 将 EP 管置于磁性分离架内，富集磁珠，去除上清液。

2. 生物配体固定：

(1) 加 500μL 蛋白溶液于EP管中，涡旋30s，使其混合均匀。

注：磁珠洗涤后要立即加入蛋白溶液。

(2) 将 EP 管涡旋15s，置于垂直混合仪上，室温混合1~2h。如果垂直混合不均匀，则反应前30min，每隔5min取下EP管涡旋15s。此后，每隔15min，取下EP管涡旋15s。

注：如有需要可以4ºC过夜反应。

(3) 采用磁性分离架富集磁珠，保存流穿液

3. 磁珠封闭：

(1) 加 500μLBlocking Buffer 于 EP 管中，涡旋30s，将 EP 管置于磁性分离架内，富集磁珠，弃上清液。

注：Blocking Buffer 除了试剂盒中提供的3M乙醇胺外，也可以使用100mMTris-HCl,150mMNaCl, pH 8.0 等其它封端试剂。

(2) 重复“步骤 （1）"四次。

(3) 加 500μLBlocking Buffer 于 EP 管中，涡旋 30s，将 EP 管置于垂直混合仪中室温反应2h。

(4) 将 EP 管置于磁性分离架内，富集磁珠，弃上清液。

(5) 加 1mL 超纯水于 EP 管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，弃上清液。

4. 保存：

(1) 加 1mLStorage Buffer（需客户自备，比如含0.05%叠dan化na或0.1%proclin-300的PBS 缓冲液，或者客户根据自己实际需求选择合适的保存溶液 ）于EP管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，弃上清液。重复该操作 2 次。

(2) 加入0.5mLStorage Buffer 于 EP 管中，充分混合，4ºC保存备用。

注：最终偶联蛋白的磁珠浓度为10mg/mL.

注意事项：

1. 磁珠对水分敏感。为了保证产品质量，在取样之后需立即盖上瓶盖，并用封口膜密封，于 4℃保存。

2. 禁止将磁珠干燥或冷冻。干燥和冷冻操作可能导致磁珠的聚集从而丧失结合活性。

3. 使用280nm附近的波长来测定蛋白含量是不可取的，因为 NHS 基团在280nm波长附近有很强的吸收，会严重干扰检测结果。

4. 缓冲液中含有带伯胺的物质会抑制蛋白质偶联到磁珠表面，去除伯胺物质可采用透析和脱盐的方法。

5. 蛋白稳定剂（如BSA，gelatin）会抑制抗体与磁珠的结合，因此在磁珠偶联抗体过程中，需要确保抗体保存体系中不存在含伯氨基的蛋白稳定剂。

6. NHS 基团易水解，故在用 WashingBufferA 洗涤时，一定要参照说明书进行。

7. 蛋白溶液要预先配制好，WashingBufferA 洗涤完毕后，要立即加入蛋白溶液进行偶联反应。

8.蛋白质和磁珠的偶联效率因蛋白质种类和性质差异而不同。一般而言，蛋白质浓度为0.1-3.0 mg/mL 时利于蛋白质偶联；然而，对于不同的蛋白其浓度需要优化。

NHS磁珠Mag NHS-常备现货

产品订购信息：

M0238  NHS磁珠Mag NHS NHS magnetic beads  1ml/5ml