来源于Stbl2 菌株（Stbl2为JM109衍生菌株），用于克隆不稳定序列（如重复序列，逆转录病毒序列等）和甲基化的DNA序列，特别适合构建重组逆转录病毒或慢病毒质粒。
Stbl4感受态细胞 载体构建

NobleRyder C9348 Stbl4感受态细胞

产品货号：C9348

产品名称：Stbl4感受态细胞

产品规格：20×100μl

Stbl4感受态细胞 载体构建

产品简介：

储存条件：-70℃

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder C9348 Stbl4感受态细胞来源于Stbl2 菌株（Stbl2为JM109衍生菌株），用于克隆不稳定序列（如重复序列，逆转录病毒序列等）和甲基化的DNA序列，特别适合构建重组逆转录病毒或慢病毒质粒。可用于大质粒的构建和扩增，适用于构建和扩增质粒 cDNA 文库。区别于Stbl2 菌株，Stbl4 菌株在 IPTG和X-gal 存在的条件下，可进行α互补原理的蓝白斑筛选实验。感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率大于108cfu/μg。

基因型:

mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1endA1gyrA96gal-thi-1supE44 λ- relA1 Δ(lac-proAB)/F′ proAB+ lacIqZΔM15 Tn10 (TetR)

菌株抗性：对氨苄qing霉素，卡na霉素，壮guan霉素敏感；对四huan素有抗性。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入质粒DNA 或5-10μL连接产物到细胞中，用手指拨da管底，轻轻混匀；

2. 冰水浴中放置15-30分钟，不要晃动；

3. 42℃热击60秒钟，不要晃动；

4. 冰水浴中放置2分钟，不要晃动；

5. 加入500μL无菌的SOC或LB培养基；

6. 置于37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养60分钟；

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养12-16小时。

（当克隆不稳定片段时，为了降低重组错误率，复苏培养和涂布培养最好采用 30℃的培养条件，平板在30℃培养时需要24小时左右。）

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μL吸头轻轻吹打散菌块，取10μL重悬的菌液分多点滴在抗性LB平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。37℃培养过夜。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）

注意事项：

1．感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2．实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3．转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4．转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5．为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最di。

Stbl4感受态细胞 载体构建 

产品订购信息：

C9348 Stbl4感受态细胞  20×100μl