适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac系统中同源重组的菌株，用于产生重组Bacmid。
DH10BAC 感受态细胞 载体构建

NobleRyder C9268 DH10BAC 感受态细胞

产品货号：C9268

产品名称：DH10BAC 感受态细胞

产品规格：20*100ul/10*100ul

DH10BAC 感受态细胞 载体构建

产品简介：

储存条件：-70℃

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder C9268 DH10BAC 感受态细胞适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac系统中同源重组的菌株，用于产生重组Bacmid。DH10Bac细胞包含亲本BacmidbMON14272和辅助质粒pMON7124 。亲本Bacmid 包含一个mini-F 复制子、卡na霉素抗性基因、attTn7位点和lacZα-互补因子。辅助质粒包含四huan素抗性和tnsABCD 区域，该区域提供了mini-Tn7从供体质粒插入亲本Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如 pFastBac 系列质粒（pFastBac1，pFastBacDual等）含有Tn7R和Tn7L同源重组臂，Tn7R和Tn7L之间包含庆da霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和SV40 病毒的 PolyA 加尾信号。当含有靶基因 pFastBac 的重组质粒转化到 DH10Bac 细胞后，发生重组后就可产生重组Bacmid，提取纯化重组Bacmid转染昆虫细胞Sf9或Sf21就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac细胞中的Theφ80dlacZΔM15基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组Bacmid的蓝白斑筛选。大肠杆菌DH10Bac感受态细胞是经特殊工艺制备，使用pUC19 质粒检测，转化效率可达107cfu/μg。

基因型：

F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu)7697galUgalKλ-rpsLnupG/pMON14272/pMON7124

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。

2. 向感受态细胞悬液中加入1-10ng重组质粒，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。

3. 将离心管置于42℃水浴中放置90秒钟，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2分钟，该过程不要摇动离心管。

4. 向每个离心管中加入900μL无菌的SOC（不含抗生素），混匀后置于37℃200rpm，摇床振荡培养4小时。

5. 用SOC培养基进行10倍梯度稀释，如分成3个稀释梯度 10-1，10-2，10-3。

6. 取100μL 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体wan全吸收后，倒置平板，37℃培养 24-48小时。

7. 保留剩余的菌液于4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。

注意事项：

1．感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2．实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3．转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4．转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5．为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最di。

DH10BAC 感受态细胞 载体构建 

产品订购信息：

C9268 DH10BAC 感受态细胞  20*100ul/10*100ul