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品牌 | NobleRyder/诺博莱德 | 货号 | C9118 |
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规格 | 10*100μl | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药 |
NobleRyder C9118 Turbo感受态细胞
产品货号:C9118
产品名称:Turbo 感受态细胞
产品规格:10*100μl
Turbo感受态细胞 载体构建
产品简介:
储存条件:-70℃
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
NobleRyder C9118 Turbo 感受态细胞
是采用大肠杆菌Turbo菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。Turbo 菌株是生长最快的大肠杆菌菌株,菌株平板上6.5小时可见克隆,摇菌4-6小时可提取质粒。核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。菌株的LacIq基因的表达受到严格控制,可克隆毒性基因。ΔlacZM15基因的存在可用于蓝白斑筛选。菌株还具有抗T1噬菌体感染的特点。Turbo感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率大于109cfu/μgDNA。
基因型:
F'proA+B+lacIqΔlacZM15/fhuA2Δ(lac-proAB)glnVgalK16galE15R(zgb-210::Tn10)TetSendA1thi-1Δ(hsdSmcrB)5
菌株抗性: 对氨苄qing霉素、氯mei素、卡na霉素、壮观mei素、链mei素、四huan素敏感。
操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入质粒DNA或5-10μL连接产物到细胞中,用手指拨da管底,轻轻混匀。
2.冰水浴中静置30分钟。
3.42℃热击60秒钟,不要晃动。
4.冰水浴中静置2分钟。
5.加入500μL 的室温的SOC或LB培养基。
6.置于37℃摇床中,150-200rpm 震荡复苏培养60分钟。
7.取 50-100μL 菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃过夜培养。
(平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm 离心30秒钟,弃掉上清,留100μL左右的液体,用200μL 吸头轻轻吹打散菌块,取10μL重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化,连接产物转化最好用涂布法。)
(质粒快速转化步骤:对于氨苄青mei素抗性的质粒,将步骤2的时间缩短到5分钟,完成步骤4后,可直接涂布或划线于含氨苄qing霉素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。)
注意事项:
1.感受态细胞应保存在-70℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。
2.实验过程中应严格无菌操作,防止其它DNA或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3.转化时,转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4.转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/铺板DNA总量。
5.为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到最di。
Turbo感受态细胞 载体构建
产品订购信息:
C9118 Turbo 感受态细胞 10*100μl