NobleRyder C9258 T7表达感受态细胞为大肠杆菌BL21增强型菌株，为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型，主要适用于含有T7启动子的原核表达载体（如pET等）的蛋白表达，同样适用于需要大肠杆菌RNA聚合酶来转录RNA的非T7启动子的表达载体（如pGEX等）。
T7表达感受态细胞 载体构建

NobleRyder C9258 T7表达感受态细胞

产品货号：C9258

产品名称：T7表达感受态细胞

产品规格：10*100ul/20*100ul

T7表达感受态细胞 载体构建

产品简介：

储存条件：-70℃

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder C9258 T7表达感受态细胞为大肠杆菌BL21增强型菌株，为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型，主要适用于含有T7启动子的原核表达载体（如pET等）的蛋白表达，同样适用于需要大肠杆菌RNA聚合酶来转录RNA的非T7启动子的表达载体（如pGEX等）。该菌株区别于BL21(DE3)菌株的优势在于T7RNA聚合酶基因整合在细菌染色体上的lac操纵子区域，基因组中无λ前噬菌体序列，并具有抗T1噬菌体感染等特点。T7表达感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率大于108cfu/μg。

基因型:fhuA2lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm]R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 (mcrCmrr)114::IS10

菌株抗性：对氨苄qing霉素，卡na霉素，壮guan霉素，氯霉su，链霉su和四环su敏感。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入质粒DNA或5-10μL连接产物到细胞中，用手指拨da管底，轻轻混匀；

2. 冰水浴中放置30分钟，不要晃动；

3. 42℃热击60秒钟，不要晃动；

4. 冰水浴中放置2分钟，不要晃动；

5. 加入500μL无菌的SOC或LB培养基；

6. 置于37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养60分钟；

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心30秒钟，弃掉上清，留100μL左右的液体，用200μL 吸头轻轻吹打散菌块，取10μL重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）

（质粒快速转化步骤：将步骤2的时间缩短到5分钟，对于氨苄青霉su抗性的质粒，步骤4完成后，可直接涂布或划线于含氨苄青霉su抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。）

注意事项：

1．感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2．实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3．转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4．转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。

T7表达感受态细胞 载体构建 

产品订购信息：

C9258 T7表达感受态细胞  10*100ul/20*100ul