核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。
核蛋白提取试剂盒-蛋白组实验、质谱适用

诺博莱德 核蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）

NobleRyder P5086 核蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）

产品货号：P5086

产品名称：核蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）

产品规格：50T/100T

核蛋白提取试剂盒-蛋白组实验、质谱适用

产品简介：

中文名称：核蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）

规格：100T ; 50T

储存条件：2-8℃，1 year

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder P5086 核蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）

核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。本试剂盒含有的独te配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含SDS、TritonX-100、chaps等可能影响质谱实验的组份，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移，因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(MassSpectrometry,MS)检测和分析，蛋白质组学(proteomics)等相关研究。本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

适用样本：动物细胞/组织

注：

1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3. 试剂拆封后请尽快使用完！

产品简介：

核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。

本试剂盒含有的独te配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含SDS、Triton X100、chaps等可能影响质谱实验的组份，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。

本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移，因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry,MS)检测和分析，蛋白质组学(proteomics)等相关研究。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白也可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shi凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

自备试剂和仪器：

离心机、振荡器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒，PBS缓冲液、蛋白定量试剂盒，离心管、吸头、一次性手套

产品特点：

1、使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2、将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。

3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5、蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

6、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 5 种独立的蛋白酶抑制剂 Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

使用注意事项：

1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖

时试剂损失。

2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

4. 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

5. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

6. Western实验内参可以选用Lamin B、TBP、Histon H3。

操作步骤

1.提取液制备：

将试剂B1和试剂B2混合，配成蛋白提取液B，充分混匀备用。

每500μl蛋白提取液B中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

【注】:

1)蛋白提取液B短期置4℃保存，长期不用的可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。

2)根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制剂可以一次加入。

3)加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

4)以下步骤中使用的蛋白提取液B为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2. 取5×10⁶-1×10⁷个细胞（大约50 mg细胞/50μl细胞），在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

【注】

1) 组织样本用jian刀剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器/机匀浆至无明显肉眼可见固体。匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。

3.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4.大约每20μl细胞（离心后细胞沉淀体积）中加入200-300μl冷的提取液A，高速涡旋振荡混匀或吹打混匀，置2-8℃条件振荡10-30分钟。

【注】:

1)提取液A处理后细胞体积应减少，否则延长提取液A振荡处理时间。

2)使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

3)没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

5.然后在4℃，2000×g条件下离心10分钟。弃上清，收集沉淀。

6.在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。

【注】:

1)加提取液B前，必须尽可能吸干提取液A。否则会影响核蛋白纯度。

2)也可以用PBS将沉淀洗涤一次。PBS重悬沉淀，2000×g离心15分钟。

3)提取液B用量根据实验细胞数量情况调整，细胞数量多则多加。也可根据预实验时最终蛋白浓度实际情况调整。

7. 置2-8℃条件振荡30-40分钟。

【注】:

1)使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

2)没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

3)此步骤蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的蛋白复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300 w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。如果引入其他外源性蛋白质不影响下游实验的话，也可以加入DNase处理。

8.在4℃，12000×g条件下离心10分钟。

9.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。

10.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】:

1)建议用BCA法进行蛋白定量。

2)蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

11. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。

【注】:

1)蛋白样品中含有盐，需要脱盐处理后用于双向电泳。

2)经透析或脱盐处理的蛋白样品不含有去垢剂和高浓度盐。

核蛋白提取试剂盒-蛋白组实验、质谱适用

产品订购信息：

P5086  核蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）  50T/100T