细菌膜蛋白/胞质蛋白提取试剂盒可以从各种菌体中提取膜蛋白和胞质蛋白。提取过程简单方便。本试剂盒含有的du特配方能够有效溶解细胞膜组份，试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。
细菌膜蛋白 胞质蛋白提取试剂盒

诺博莱德 细菌膜蛋白/胞质蛋白提取试剂盒

NobleRyder P5007 细菌膜蛋白/胞质蛋白提取试剂盒

产品货号：P5007

产品名称：细菌膜蛋白/胞质蛋白提取试剂盒

产品规格：50T/100T

细菌膜蛋白 胞质蛋白提取试剂盒

产品简介：

中文名称：细菌膜蛋白/胞质蛋白提取试剂盒

规格：100T ; 50T

储存条件：2-8℃，1 year

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

细菌膜蛋白/胞质蛋白提取试剂盒可以从各种菌体中提取膜蛋白和胞质蛋白。提取过程简单方便。本试剂盒含有的du特配方能够有效溶解细胞膜组份，试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。本试剂盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gelshift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

适用样本：细菌

注：

1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3. 试剂拆封后请尽快使用完！

产品简介：

细菌膜蛋白/胞质蛋白提取试剂盒可以从各种菌体中提取膜蛋白和胞质蛋白。提取过程简单方便。本试剂盒含有的du特配方能够有效溶解细胞膜组份，试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本试剂盒中不含有 EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于 2D 电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于 2D 电泳，用脱盐柱脱盐处理。

产品特点：

1、使用方便，从细菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。

2、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

3、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

4、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含

6 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

5、本品可用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

6、本品不含 EDTA，可以用于金属螯合层析等下游应用。

自备试剂和仪器：

离心机、振荡器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 缓冲液、蛋白定量试剂盒，离心管、吸头、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事项：

1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

4. 蛋白酶抑制剂在 2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或 37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

5. 提取液 A 在使用前须一直置于 2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。

6. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

二、操作步骤

1. 提取液制备：

每 500ul 冷的提取液 A 中加入 5ul 提取液 B 和 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。

【注】：

1) 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

3) 蛋白样品用于测定某些蛋白酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。

4) 提取液 A 在使用前须一直置于 2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。

5) 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2. 离心收集菌体，用 PBS 洗菌体 2 次。

【注】：

1) 加入 PBS 重悬混匀，5000×g 离心 10 分钟。

2) 不同菌种需要的离心力有差异，可以根据实际情况调整离心力，采用平时收集菌体的转速即可。

3. 按每 100-150mg 湿重菌体样本加入 500ul 冷的提取液 A（大约菌体和提取液体积比 1:3-1:5，wan全淹没菌体即可），吹打混匀，在 2-8℃振荡 1-2 小时，至菌体裂解wan全，液体澄清，菌体沉淀减少。

【注】：

1) 必须在 2-8℃条件下振荡。不可以室温振荡

2) 使用振荡器或摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。可以盖紧离心管，将离心管倾斜放置或者横置，以利于液体振荡。

3) 如果没有 2-8℃持续振荡条件，也可直接置 2-8℃冰箱静置 1-2 小时，中间每隔 10 分钟涡旋振荡混匀即可。

4) 如果有超声条件，可以在 40-300w，超声 5s/间隔 5s 条件下超声几分钟，至澄清。超声有利于提高膜蛋白回收率。

4. 将菌液在 2-8℃低温下 12000×g 离心 5 分钟，取上清。

5. 在 37℃水浴 10 分钟。

6. 在 37℃，1000×g 离心 3 分钟。

【注】：

1) 此步骤必须 37℃条件下离心。

2) 如果离心机不可控温，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液分层清晰即可。或者在室温条件下离心，缩短离心时间至 1 分钟。

7. 此时液体分为 2 层，小心移除上层溶液，即得到胞质蛋白。

8. 留管底部下层，大约 50ul 液体。

【注】：

1) 下层为粘稠状液体。

2) 未wan全分好层时看上去可能像 3 层，保留中间的界面层即可。

9. 用 50-200μl 冷的膜蛋白溶解液溶解该下层溶液，即得细菌膜蛋白样品。

【注】：

1) 膜蛋白比较难溶解，不能很快溶解混匀，可以在加入溶解液后稍微吹打混匀，然后置于 4℃冰箱静置至溶解。中途用移液器轻轻吹打混匀一次。静置后取出再次用移液器稍微吹打混匀即可。

2) 静置直至管底透明胶状物wan全溶解。

10. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

1) 建议用 BCA 法进行蛋白定量。

2) 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

注意事项：

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得优良实验效果。

2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并che底清除残留清洁剂。

6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

细菌膜蛋白 胞质蛋白提取试剂盒

产品订购信息：

P5007  细菌膜蛋白/胞质蛋白提取试剂盒  50T/100T