这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为 细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类 的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。
动物细胞组织内质网提取试剂盒

诺博莱德 内质网提取试剂盒

NobleRyder P4935 内质网提取试剂盒

产品货号：P4935

产品名称：内质网提取试剂盒

产品规格：50T/100T

产品简介：

中文名称：内质网提取试剂盒

规格：50T ; 100T

储存条件：2-8℃，1 year

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

适用样本：动物细胞/组织

产品介绍

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互 相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质 之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为 细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。

内质网提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网的提取。 本试剂盒适用于各种粗面内质网和光面内质网的提取。

本试剂盒可以用于完整内质网提取相关的实验，也可以用于下游内质网蛋白提取等实验。

动物细胞组织内质网提取试剂盒

注：

1. 提取液长期不用时置于-20℃保存 ，15 天内要多次使用的话置 4℃保存即可。

2. 试剂拆封后请尽快使用完！

产品简介：

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互 相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。

内质网提取试剂盒可用于各种动物细胞和组织样本的完整内质网提取，也可以用于下游内质网蛋白提取等实验。

本试剂盒适用于各种粗面内质网和光面内质网的提取。

本试剂盒可以用于完整内质网提取相关的实验，也可以用于下游内质网蛋白提取等实验。

本试剂盒需要使用高速离心，没有高速离心的条件时，可以选择低速离心法内质网提取试剂盒。

自备试剂及设备

离心机、振荡器、匀浆机/Dounce 匀浆器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒、PBS 缓冲液、离心管、吸头、一次性手套 、细胞筛

使用方法（仅供参考）：

一、使用注意事项：

1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

3. 最好使用 Dounce 匀浆器匀浆，如果没有 Dounce 匀浆器，用普通 1ml 玻璃匀浆器匀浆也可，但是内质网回收率可能会下降。

4. 要求离心力 50000g 的离心，没有条件的话可以采用 30000g -50000g 离心力，最好能达到 45000g 左右。最小离心力需要保证 30000g。

5. 如果需要回收所有光面内质网小泡，最后一个离心步骤的离心力需要提高到 100000g 力。

6. 离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有 RPM 和×g 显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：g=r×1.118×10^-5×rpm²（r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米)

例如: 转速为 3000rpm，有效离心半径为 10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

二、操作步骤

细胞内质网蛋白提取：

1. 取 1-2×107 个细胞，在 4℃，500×g 条件下离心 5 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；

2. 用冷 PBS 洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

【注】：

1. 在 500×g 条件下离心 5 分钟。

3. 加入 500 μl-1 ml 冷的试剂 A，置冰上 10 分钟。

4. 用 Dounce 匀浆器匀浆 30-40 下。

5. 将匀浆液在 4℃，1000×g 力条件下离心 5 分钟。弃沉淀，收集上清。

6. 将上清在 4℃，11000×g 力条件下离心 10 分钟，弃沉淀，收集上清。

7. 将上清在 4℃，50000×g 力条件下离心 45 分钟。弃上清，收集沉淀。

【注】：

1. 如果条件允许，可将离心力加大到 100000×g，有利于提高光面内质网小泡回收率。

2. 如果用大的离心转头，液体量太少不好离心的话，可以添加 PBS 增加液体量。

3.没有高速离心的条件时，可以选择低速离心法内质网提取试剂盒。

4.沉淀是离心管底部薄薄一层。不是明显团块。

8. 在沉淀中加入 400 μl 冷的试剂 B，混匀。

9. 在 4℃，50000×g 力条件下离心 45 分钟。

【注】：

1. 如果用大的离心转头，液体量太少不好离心的话，可以添加 PBS 增加液体量。

2.没有高速离心的条件时，可以选择低速离心法内质网提取试剂盒。

3. 如果期望回收所有光面内质网小泡，离心力需要提高到 100000×g 力。

10. 弃上清，沉淀用内质网保存液重悬。

【注】：

1.也可不用试剂盒中的内质网保存液重悬，根据下游实验需要选择合适的缓冲液重悬内质网或直接用于下游实验。

2. 需要提取内质网蛋白时可以直接在沉淀中加入适量蛋白裂解液进行裂解。

3. 沉淀是离心管底部薄薄一层。不是明显团块。

11. 即得到内质网样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

组织内质网提取：

1. 取 50 mg -100 mg 新鲜动物组织样本，用 PBS 洗涤干净。

2. 用剪dao尽可能剪碎，用冷 PBS 洗涤两次。

【注】：

1. 在 500×g 条件下离心 5 分钟。

3. 加入 500 μl-1 ml 冷的试剂 A，置冰上 10 分钟。

4. 用 Dounce 匀浆器充分匀浆 30-40 下，至无明显固体团块。然后在 4℃，1000×g 力条件下离心 5 分钟。

5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。

6. 在 4℃，11000×g 力条件下离心 10 分钟，弃沉淀，收集上清。

7. 将上清在 4℃，50000×g 力条件下离心 45 分钟。弃上清，收集沉淀。

【注】：

1. 如果条件允许，可将离心力加大到 100000×g，有利于提高光面内质网小泡回收率。

2. 如果用大的离心转头，液体量太少不好离心的话，可以添加 PBS 增加液体量。

3. 没有高速离心的条件时，可以选择低速离心法内质网提取试剂盒。

4. 沉淀是离心管底部薄薄一层。不是明显团块。

8. 在沉淀中加入 400 μl 冷的试剂 B，混匀。

9. 在 4℃，50000×g 力条件下离心 45 分钟。

【注】：

1. 如果用大的离心转头，液体量太少不好离心的话，可以添加 PBS 增加液体量。

2. 没有高速离心的条件时，可以选择低速离心法内质网提取试剂盒。

3. 如果期望回收所有光面内质网小泡，离心力需要提高到 100000×g 力。

10. 弃上清，沉淀用内质网保存液重悬。

【注】：

1. 也可不用试剂盒中的内质网保存液重悬，根据下游实验需要选择合适的缓冲液重悬内质网或直接用于下游实验。

2. 需要提取内质网蛋白时可以直接在沉淀中加入适量蛋白裂解液进行裂解。

3.沉淀是离心管底部薄薄一层。不是明显团块。

4. 即得到内质网样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

注意事项：

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得优良实验效果。

2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并che底清除残留清洁剂。

6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

动物细胞组织内质网提取试剂盒

产品订购信息：

P4935  内质网提取试剂盒  50T/100T