SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。
诺博莱德 DAB法显色试剂盒 显色与信号检测

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NobleRyder  SW9818  DAB法显色试剂盒（山羊IgG）,Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

产品货号：SW9818

产品名称：DAB法显色试剂盒（山羊IgG）,Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

产品规格：1盒

产品简介：

英文名称：Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

中文名称：DAB法显色试剂盒（山羊IgG）

规格：1盒

储存条件：-20℃，avoid light，1 year

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

保存：

-20℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和 20 倍 DAB 显色液B 存放于 2-8℃以方便使用。

产品简介：

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。

操作步骤：(仅供参考)

常规电泳转膜后:

1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min, 以尽量洗去转印膜上的 SDS，防止影响后面的抗体结合。

2) 按 5g 封闭试剂加100ml 双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭 30min。用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗 3 次每次 5min。

3) 将 10×抗体稀释液用双蒸水稀释成 1×（10ml 10×抗体稀释液加入 90ml 双蒸水，混匀，可 4℃ 保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。

4) 用 1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或 37℃摇动孵育 2h。此用过的抗体一般可回收第二 天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。

5) 用 TBS-T，PH7.6洗液，室温漂洗 3 次每次 5min。

6) 用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量，按 10ml 抗体稀释液加入 1-2ul HRP 标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育 1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。

7) 用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗 3 次每次 10min。

8) 配制 DAB 显色：根据用量，取 TBS-T 4ml，加入 DAB 显色液 A、DAB 显色液 B 各200ul，混匀，加 在膜正面，室温下显色。在目标条带显出后，而且背景未出时，放入水中终止显色。

注意事项：

1. 请根据一抗来源选择试剂盒。

2. western blotting DAB 显色法操作简单，但其敏感性与 ECL 发光发有一定的差距，一般只适用于丰 度较高的蛋白。

3. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与 时间。如果条带过弱，可延长抗体孵育时间。

4. 如果wan全没有条带，请检查前期蛋白处理及实验过程， 如果确认无误，反复两次依旧无结果， 请换用 ECL 发光法显色。

5. TBS-T（0.01M）配制方法：称取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的双蒸水溶解，用盐酸调 PH 到 7.6，再加入 0.5ml Tween－20，用双蒸水 加至 1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）

 诺博莱德 DAB法显色试剂盒 显色与信号检测