SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。
ECL化学发光法检测试剂盒 显色与信号检测

ECL化学发光法检测试剂盒 显色与信号检测

NobleRyder  SW0898  ECL化学发光法检测试剂盒（小鼠IgG）,Western blotting（小鼠IgG）

产品货号：SW0898

产品名称：ECL化学发光法检测试剂盒（小鼠IgG）,Western blotting（小鼠IgG）

产品规格：1盒

产品简介：

英文名称：Western blotting（小鼠IgG）

中文名称：ECL化学发光法检测试剂盒（小鼠IgG）

规格：1盒

储存条件：-20℃，avoid light，1 year

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder  SW0898  ECL化学发光法检测试剂盒（小鼠IgG）,Western blotting（小鼠IgG）产品简介：

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。

操作步骤：(仅供参考)

常规电泳转膜后:

1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min,以尽量洗 去转印膜上的 SDS，防止影响后面的抗体结合。

2) 按 5g 封闭试剂加 100ml 双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭 30min。用 TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗 3 次每次 5min。

3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成 1×（10ml 10×抗体稀释液加入 90ml 双蒸水，混匀，可 4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。

4) 用 1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入 一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或 37℃摇动孵育 2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所 加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。

5) 用 TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次 5min。

6) 用 1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入 1-2 ul HRP 标记二抗的比例，配制二抗工作 液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育 1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用 一次。

7) 用 TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次10min。

8) 根据用量，取 ECL 发光液 A、B 等量混匀，加在膜正面，暗室显色 1-5 分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色 30 秒到 1 分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中 1 分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间（从 5 秒到 30 分钟）以期达到理想结果。

注意事项：

1. 请根据一抗来源选择试剂盒。

2. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条 带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。

3. TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：称取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的双蒸水溶解，用盐酸调 PH 到 7.6， 再加入 0.5ml Tween－20，用双蒸水 加至 1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）

 ECL化学发光法检测试剂盒 显色与信号检测